[发明专利]一种黄曲霉毒素纳米抗体免疫吸附剂、免疫亲和柱及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种黄曲霉毒素纳米抗体免疫吸附剂，其特征在于：该免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体偶联的黄曲霉毒素纳米抗体，所述黄曲霉毒素纳米抗体为黄曲霉毒素B1纳米抗体2014AFB-G15，其氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，编码基因序列如SEQ IDNO:8所示。

2.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素纳米抗体免疫吸附剂，其特征在于，所述黄曲霉毒素B1纳米抗体2014AFB-G15三个互补决定区的氨基酸序列分别为：CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示、CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示、CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；三个互补决定区的编码基因序列分别为：CDR1的编码基因序列如SEQ ID NO:4所示、CDR2的编码基因序列如SEQ ID NO:5所示，CDR3的编码基因序列如SEQ ID NO:6所示。

3.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素纳米抗体免疫吸附剂，其特征在于，所述固相载体为琼脂糖凝胶或硅胶微球。

4.权利要求1~3所述的黄曲霉毒素纳米抗体免疫吸附剂的制备方法，其特征在于，

所述固相载体选用硅胶微球时，制备方法为：称取1~5g硅胶微球，用纯水和pH为6的磷酸盐缓冲液交替冲洗，再量取5~25mL pH为6的磷酸盐缓冲液溶解硅胶微球，搅拌后使硅胶微球全部悬起，得到硅胶微球悬浮液；用1~5mL pH为6的磷酸盐缓冲液溶解2~10mg黄曲霉毒素B1纳米抗体2014AFB-G15，然后逐滴加入到硅胶微球悬浮液中；最后称取70~350mg 碳二亚胺，快速加入到硅胶微球悬浮液中，4℃搅拌反应18~22h后，得到以硅胶微球为固相载体的黄曲霉毒素纳米抗体免疫吸附剂；或者

所述固相载体选用琼脂糖凝胶时，制备方法为：称取0.3~1g 琼脂糖，用1mM HCl溶液反复冲洗，将琼脂糖溶于5~15mL偶联缓冲液中，再加入0.6~2mg黄曲霉毒素B1纳米抗体2014AFB-G15，在室温下搅拌反应1~2h，得到琼脂糖凝胶溶液，将琼脂糖凝胶溶液中未与琼脂糖凝胶偶联的抗体溶液过滤后，用偶联缓冲液冲洗琼脂糖凝胶，再加入0.1M、pH8.0的Tris-HCl缓冲液，室温下反应2h，然后用0.1M、pH8.0的Tris-HCl缓冲液和0.1M、pH4.0的Tris-HCl缓冲液交替冲洗琼脂糖凝胶后，得到以琼脂糖凝胶为固相载体的黄曲霉毒素纳米抗体免疫亲和吸附剂，所述偶联缓冲液为0.1M NaCO₃、0.5M NaCl、pH8.3。

5.装载有权利要求1~3所述的黄曲霉毒素纳米抗体免疫吸附剂的黄曲霉毒素纳米抗体免疫亲和柱。

6.权利要求5所述的黄曲霉毒素纳米抗体免疫亲和柱的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将黄曲霉毒素纳米抗体免疫吸附剂填充于固相萃取管中，加入pH 6，0.01M的磷酸盐缓冲液后自然沉淀，然后用pH 6，0.01M的磷酸盐缓冲液洗涤后，保存于含0.02wt%叠氮钠的pH 6，0.01M的磷酸盐缓冲液中，得到黄曲霉毒素纳米抗体免疫亲和柱。

7.权利要求5所述的黄曲霉毒素纳米抗体免疫亲和柱的应用，其特征在于，利用所述黄曲霉毒素纳米抗体免疫亲和柱对上机前样品提取液进行净化与浓缩。

8.根据权利要求7所述的黄曲霉毒素纳米抗体免疫亲和柱的应用，其特征在于，具体操作为：首先将制备好的黄曲霉毒素纳米抗体免疫亲和柱用纯水冲洗，然后加入样品提取液，最后用纯水淋洗，待液体流干后，再用甲醇洗脱，收集洗脱液，所述洗脱液即为净化与浓缩后的样品提取液，可直接用于上机检测。