[发明专利]一种定量检测C肽的胶乳增强免疫比浊试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于体外诊断试剂领域，具体涉及一种采用胶乳增强免疫比浊法定量测定检测标本中C肽含量的试剂盒。

背景技术

C肽（C-Peptide）又称连接肽，由31个氨基酸组成，分子量为3020道尔顿，是胰岛素原中连接胰岛素A链和B链的一段短肽，其作用在于促进胰岛素分子在β细胞内质网中合成，并使胰岛素进行有效折叠和装配。临床上对于C肽的测定主要用来正确评价胰岛β细胞功能变化及发展规律，以及对糖尿病类型的准确判断和病情监控。

人体胰岛β细胞合成胰岛素原，随后胰岛素原被等摩尔地切割成胰岛素和C肽。因此，胰岛β细胞分泌的胰岛素和C肽呈等分子关系，血中C肽浓度可间接反应胰岛素浓度。而与胰岛素相比，C肽在体内不被肝脏分解，只能通过肾脏清除，且半衰期较长（C肽的半衰期大于30min，胰岛素的半衰期为3～4min），在血清中的浓度几乎是胰岛素的10倍，因此C肽水平更能准确反映胰腺中β细胞的分泌功能。

此外，人源和动物源以及各种改进的胰岛素在氨基酸序列和结构上类似，导致了它们的免疫原性相近，在检测中不易区分。如果通过检测血中的胰岛素水平来评价胰岛功能，容易受到外源性胰岛素的影响，而外源性胰岛素中不含有C肽，且C肽不受胰岛素治疗中产生的胰岛素自身抗体的干扰，因此，测定C肽对内源性胰岛素的分泌能力评价更具有临床意义。尽管测量C肽的抗体容易与胰岛素原发生交叉反应，但是胰岛素原一般不会出现在血中，游离C肽的含量大概占总C肽含量的90%以上，所以临床上一般通过直接测定血清总C肽的含量来对β细胞进行评价。

目前，临床上对C肽的测定方法主要包括放射免疫法（Radioimmunoassay，RIA）、酶联免疫吸附测定法（Enzyme-Linked，Immunosorbent Assay，ELISA）及化学发光法等，其中RIA法虽然灵敏度高，但对设备要求较高、检测结果不稳定且存在放射性污染；ELISA定量准确性差，操作时间长，自动化程度低，无法满足临床上大量、快速检测的需求；化学发光法则存在仪器维护昂贵，易受干扰，重复性差的缺点。

发明内容

针对现有技术存在的上述不足，本发明要解决的技术问题是：提供一种稳定性好，测试效率高，测试结果准确，灵敏度高的定量检测C肽的胶乳增强免疫比浊试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种定量检测C肽的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，包括C肽R1试剂、C肽R2试剂和C肽校准品；

所述C肽R1试剂由缓冲液、保护剂Ⅰ、反应增强剂和防腐剂得到；

所述C肽R2试剂由缓冲液、保护剂Ⅰ、防腐剂和包被抗人C肽抗体的致敏聚苯乙烯胶乳颗粒得到；其中包被抗人C肽抗体的致敏聚苯乙烯胶乳颗粒由抗人C肽抗体和聚苯乙烯胶乳颗粒偶联得到；所述抗人C肽抗体为鼠源抗人C肽抗体、兔源抗人C肽抗体或者羊源抗人C肽抗体；

所述C肽校准品由缓冲液、保护剂Ⅱ、防腐剂和C肽重组蛋白得到。

上述技术方案中，将抗人C肽抗体以定向化学偶联的方式连接在聚苯乙烯胶乳颗粒表面，当检测标本中的C肽抗原与试剂盒中的抗人C肽抗体发生免疫反应后形成聚集颗粒而产生浊度，通过在400～700nm波长下测定其浊度即可计算出检测标本中的C肽含量。

上述技术方案中，C肽R2试剂中包被抗人C肽抗体的致敏聚苯乙烯胶乳颗粒由抗人C肽抗体和聚苯乙烯胶乳颗粒偶联得到，其中抗体与聚苯乙烯胶乳颗粒的重量比可以为0.5～20：100，抗人C肽抗体为鼠源抗人C肽抗体、兔源抗人C肽抗体或者羊源抗人C肽抗体，其可以和检测样本中的抗原发生免疫反应；优选鼠源抗人C肽抗体，这是因为其免疫原性、抗原结合亲和力、血清半衰期更为理想，与血清中的C肽特异性结合能力高，可以大大提高检测的准确性。

作为优化，所述缓冲液为PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或者几种；

其中C肽R1试剂中缓冲液的浓度为20～200mM；C肽R2试剂中缓冲液的浓度为20～200mM；C肽校准品中缓冲液的浓度为20～200mM。