[发明专利]一种利用猪血制备亚硝基血红蛋白的方法

权利要求书

1.一种利用猪血制备亚硝基血红蛋白的方法，其特征在于：包括如下步骤：

①从新鲜猪血中分离出血细胞；

②从血细胞只能怪提取出血红蛋白粗提液；

③纯化血红蛋白，并测定其纯度：在步骤②中得到的血红蛋白粗提液中加入抗氧化剂真空脱气，并通入N₂保护，于60℃水浴加热30min使杂蛋白沉淀，然后离心取上清液；纯化后的血红蛋白溶液加入10mg/ml甘油后置于4℃冰箱中保存备用；最后再测定血红蛋白含量；

④合成亚硝基血红蛋白：在纯化后的血红蛋白中加入NaOH，同时加入亚硝酸钠、维生素C，调节pH为酸性，加热至50-70℃保持25-45min，真空冷冻干燥后生成红色粉状物即为亚硝基血红蛋白。

2.根据权利要求1所述的一种利用猪血制备亚硝基血红蛋白的方法，其特征在于：上述步骤②的具体方法是：加入血红蛋白体积1.5倍的蒸馏水，混合均匀后电磁搅拌30min；当溶液由暗红转为鲜红时，将溶液以3000r／min离心15min，弃去沉淀，得血红蛋白粗提液。

3.根据权利要求1所述的一种利用猪血制备亚硝基血红蛋白的方法，其特征在于：上述步骤③测定血红蛋白含量的方法是：

①AHD-575试剂的配制：准确称取聚乙二醇辛基苯基醚25.0g，加入0.1mol/LNaOH溶液定容至1L，过滤，室温下保存备用；

②标准曲线的制作：将猪血红蛋白标准品配制成不同浓度的溶液，分别吸取0.1ml加入到30mLAHD-575试剂中，静置反应5min，于575m波长下，以AHD-575试剂为空白，测定吸光度；以猪血红蛋白标准品的浓度(g/L)为横坐标，以吸光度为纵坐标，得出血红蛋白溶液浓度X与吸光度值Y的关系的标准线及回归方程；

③于洁净的烧杯中，吸取血红蛋白提取液样品0.1ml，以AHD-575的方法测定吸光度A575，查标准曲线求得血红蛋白含量(g/L)。

4.根据权利要求1所述的一种利用猪血制备亚硝基血红蛋白的方法，其特征在于：上述步骤④血红蛋白：亚硝酸钠：维生素C按照摩尔比=1:1～3:4～8的比例配制。

5.根据权利要求1所述的一种利用猪血制备亚硝基血红蛋白的方法，其特征在于：上述步骤④中调节pH为5.0～6.0。

6.根据权利要求1所述的一种利用猪血制备亚硝基血红蛋白的方法，其特征在于：上述步骤④中加入0.5gNaOH。