[发明专利]一种稀有细胞检测芯片及其应用

权利要求书

1.一种稀有细胞检测芯片，其特征在于，它包括一个基体（1）和一个与基体（1）平面吻合并密封粘合的基片（2），所述基体（1）由上层（3）、下层（4）和集成在上层（3）与下层（4）之间的细胞筛选膜(5)构成，所述上层（3）的一端设置有上层样品入口（6），另一端设置有上层样品出口（8），所述上层样品入口（6）通过上层样品输入通道（7）与一带有上层缺口（12.1）的上层环形通道（12）相连，所述上层环形通道（12）通过若干条呈辐射状设置的上层扩散通道（14）与一上层圆形样品池（16）相连，所述上层圆形样品池（16）通过上层样品输出通道（8.1）与上层样品出口（8）相连，同样，所述上层（3）的一端和下层（4）的一端设置有连通的下层样品入口（9），另一端设置有连通的下层样品出口（11），所述下层样品入口（9）通过下层样品输入通道（10）与一带有下层缺口（13.1）的下层环形通道（13）相连，所述下层环形通道（13）通过若干条呈辐射状设置的下层扩散通道（15）与一下层圆形样品池（17）相连，所述下层圆形样品池（17）通过下层样品输出通道（11.1）与下层样品出口（11）相连。

2.如权利要求1所述的稀有细胞检测芯片，其特征在于，所述下层（4）的上部设有用于安置细胞筛选膜（5）的圆形凹口（18）。

3.如权利要求1或2所述的稀有细胞检测芯片，其特征在于，所述细胞筛选膜（5）由固定环（21）和封装在固定环（21）上的微孔阵列滤膜构成，所述微孔阵列滤膜为呈密集分布和规则排列的锥形微孔阵列（19）滤膜或双层微孔阵列（20）滤膜。

4.如权利要求1或2所述的稀有细胞检测芯片，其特征在于，所述上层样品输入通道（7）、上层样品输出通道（8.1）、下层样品输入通道（10）、下层样品输出通道（11.1）、上层环形通道（12）、下层环形通道（13）、上层扩散通道（14）和下层扩散通道（15）的高度大于等于20微米，小于等于2毫米，宽度大于等于20微米，小于等于2毫米。

5.如权利要求1或2所述的稀有细胞检测芯片，其特征在于，所述上层圆形样品池（16）和下层圆形样品池（17）的高度大于等于20微米，小于等于2毫米，直径大于等于2毫米，小于等于30毫米。

6.如权利要求3所述的稀有细胞检测芯片，其特征在于，所述微孔阵列滤膜的厚度大于等于10微米，小于等于100微米，所述锥形微孔阵列（19）或双层微孔阵列（20）的小孔径直径大于等于1微米，小于等于20微米，大孔径直径大于等于5微米，小于等于100微米，所述微孔阵列滤膜的两个小孔间圆心距离大于等于2微米，小于等于500微米。

7.如权利要求2所述的稀有细胞检测芯片，其特征在于，所述圆形凹口（18）的高度大于等于20微米，小于等于2毫米，直径大于等于2毫米，小于等于30毫米。

8.一种根据权利要求1所述稀有细胞检测芯片在细胞捕获、固定及染色、细胞成像及计数过程中的应用，其特征在于：包括以下步骤：

1）灭菌：将稀有细胞检测芯片置于紫外光线下进行灭菌；

2）细胞筛选膜的表面修饰：先用注射泵在芯片中注入预先配好的蛋白溶液对细胞筛选膜表面进行表面修饰，然后注入磷酸盐缓冲液进行清洗；

3）细胞捕获：将含有癌细胞的磷酸盐缓冲液注入芯片中，使癌细胞被细胞筛选膜所捕获；

4）细胞固定：将多聚甲醛溶液注入芯片中，使捕获的细胞固定在细胞筛选膜上，然后注入磷酸盐缓冲液进行清洗；

5）细胞染色：依次注入Triton-Xl00通透液和牛血清白蛋白对细胞进行染色前处理；再注入有荧光素标记的抗体，并使之与细胞表面的特异抗原或稀有细胞的标记物相结合；在每次注入新的溶剂之后，注入磷酸盐缓冲液进行清洗；

6）成像与分析：将细胞筛选膜取出，用荧光显微镜对细胞筛选膜上的捕获的细胞进行成像并分析捕获的细胞的数目以及对应的捕获效率。