[发明专利]花椰菜毛花性状鉴定的方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及花椰菜毛花性状鉴定技术，具体地说是利用分子标记的方法鉴定花椰菜毛花技术的建立方法和应用。

背景技术

花椰菜是以花球为食用器官的蔬菜，花球质量的优劣直接关系到产值的高低，近年来在上海、浙江、安徽等省（市）连续发生早熟花椰菜毛花现象，损失严重。故开展花椰菜毛花性状研究，选育耐毛花的花椰菜品种，不仅可以帮助广大菜农免受不必要的损失，还可以减少由于灾害天气引起的市场波动，满足市场对花椰菜外观品质的要求；

但是在制种过程中由于父母本本身具有一些缺点，造成花椰菜杂种一代会有一些来自父母本的缺点被遗传下来。如，花椰菜毛花。传统的大田鉴定法以种子、幼苗、叶、花、果实、花粉等组织器官的颜色、形态等农艺性状作为鉴定的观测指标，在生产实践中虽然是一种较为可行的方法，但大田鉴定需要额外占用土地，周期长、花费大，不仅受季节限制，而且很多性状的表现受栽培措施及环境因子的影响，鉴定者的观察经验也制约着鉴定的准确性。故，如何能在短时间内鉴定花椰菜是否具有毛花性状已成为花椰菜育种的重要问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种花椰菜杂毛花性状的鉴定方法和应用；

本发明的技术构思是这样的：

本发明利用RAPD对花椰菜毛花性状的特异性进行分子标记，可以在苗期就对花椰菜是否具有毛花性状进行鉴定，进而缩短了花椰菜耐毛花育种的时间；

本发明的分子标记的引物为上海生工提供，RAPD扩增采用的引物为S76，所说的花椰菜为适合该专利的研究目标的亲本材料及其F2代，具有；

花椰菜分子标记鉴定毛花性状的建立方法，包括如下步骤：

1)提取及纯化花椰菜基因组的DNA；

2)用获得的花椰菜DNA为模板进行RAPD分析；

3)选择有代表性的多态性扩增条带，根据所选择条带的有、无进行分子标记；

4）选择具有毛花性状的花椰菜DNA进行验证；

本发明的分子标记技术可以用在花椰菜毛花性状的鉴定；

本发明具有如下优点：

    1、本发明公开了用分子标记的方法对花椰菜毛花性状进行鉴定，高效、准确、可靠；

    2、由于本发明采用分子标记技术，便于计算机识读和分析。

附图说明：

附图为本发明利用分子标记的方法对具毛花性状及非毛花形状花椰菜进行的扩增电泳图；

注：图1：为76号引物筛选琼脂糖电泳结果；图2为利用该方法验证毛花植株的琼脂糖电泳结果。

具体实施方式：

实施例1

本实施例采用SDS法提取花椰菜及其亲本的基因组DNA，通过RAPD、分子标记方法对花椰菜毛花性状进行鉴定。具体操作如下：

1、选用的试验材料：

材料为适合该专利的研究目标亲本材料及其F2代；

2、花椰菜DNA的提取及纯化：

按如下程序提取各个花椰菜材料的基因组DNA：

取新鲜组织2g，在液氮中研磨成粉，置于50 ml离心管，加入8 ml提取液(100 mM Tris pH 8.0，50 mM EDTA，500 mM NaCl，1.5％SDS)，65℃情况下30分钟，不时颠倒混匀，加2.5 ml 5M乙酸钾冰浴10分钟，加.5 ml氯仿，颠倒混匀，10000rmp离心8分钟，取上清移入新管，加2／3体积预冷异丙醇，颠倒混匀，-20℃置1-2小时，挑出絮状白色DNA，70％乙醇洗1-2次，吹干，溶于100ul(或适量)TE中，并在1％琼脂糖凝胶上电泳，用标准λDNA作对照，估算花椰菜DNA样品的浓度，获得高纯度花椰菜DNA；

3、用获得的高纯度花椰菜DNA为模板进行分子标记分析：

RAPD扩增反应采用20 μL的反应体系，其中25mmol/L MgCl2 2.0μl ，10×PCR Buffer 2.0μl，10 mmol/L dNTP 0.5μl，5U/μl Taq E 0.2μl，0.1μmol/L 引物3μl，10ng/μl模板DNA 3μl，灭菌双蒸水9.3μl。扩增程序为：94℃预变性5 min；94℃变性1 min，37℃退火1 min，72℃延伸1.5 min，40个循环；72℃延伸10 min后4℃保存。PCR产物在1.5％琼脂糖凝胶中电泳1.5h，EB染色，Gel DocTM EQ 170-8060凝胶成像仪进行观察并拍照分析；

4、引物筛选：

使用150个RAPD引物对样品DNA进行PCR扩增，其中有118个RAPD能扩增出清晰的条带，但大多数引物的扩增结果在双亲及杂交种之间是一致的，不能起到鉴别的作用。最终筛选出1个RAPD引物（S76）可以将“A1”区（具毛花性状的花椰菜）和A2（不具毛花性状的花椰菜）分开。