[发明专利]具有叶酸受体靶向和荧光双功能金簇的制备方法

权利要求书

1.叶酸受体靶向和荧光双功能金簇的制备方法及应用，其特征是包括以下步骤：

1）将氯金酸溶液、柠檬酸三钠溶液和硼氢化钠溶液混合搅拌，得到发荧光的金簇纳米粒子；

2）将11-巯基十一烷酸和叠氮十一烷基硫醇加入到上述溶液中，放置、纯化；

3） 向2）中加入炔基化叶酸，炔基化叶酸溶于1:1的水和二甲基亚砜混合溶液中；

4）向3）中加入CuSO₄和抗坏血酸催化下通过点击化学连接叠氮十一烷基硫醇和炔基化叶酸，实现叶酸受体靶向和荧光双功能金簇的制备；

5）叶酸受体靶向和荧光双功能金簇与叶酸过表达的K 562细胞进行孵育；

6）对叶酸受体靶向和荧光双功能金簇与叶酸过表达的K 562细胞进行孵育前后荧光强度的测定。

2.根据权利要求1所述在步骤1）中，所述氯金酸溶液、柠檬酸三钠溶液和硼氢化钠溶液的体积比为10:10:1；所述氯金酸溶液浓度为0.25 mmol/L，所述柠檬酸三钠溶液浓度为0.25 mmol/L，所述的硼氢化钠溶液浓度为0.01 mol/L，所述的搅拌时间为30 s。

3.根据权利要求1所述在步骤2）中，所述的11-巯基十一烷酸的浓度为100 mmol/L，所述的叠氮十一烷基硫醇10 mmol/L，所述的溶液在25℃下放置48小时，所述纯化采用分子量10 kDa 的半透膜进行透析60 min。

4.根据权利要求1所述在步骤3）中，所述炔基化叶酸的制备过程是1.0 g 叶酸溶入 10 mL二甲基甲酰胺（DMF），待完全溶解后再加入0.26 g N-羟基琥珀酰亚胺和 0.44 g 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺（EDC），得到的混合物在冰浴中继续搅拌，直至得到白色沉淀，然后再向其中加入 0.124 g 炔丙胺的 DMF 溶液(5 mL)，得到的混合物在室温下搅拌 24 h，接着加入 100 mL蒸馏水，搅拌 40 min，产生沉淀，停止反应，过滤，得到桔黄色沉淀，用丙酮洗涤，真空干燥，得炔基化叶酸。

5.根据权利要求1所述在步骤4）中，所述的CuSO₄和抗坏血酸的浓度分别为0.01 mol/L和0.05 mol/L。

6.根据权利要求1所述在步骤5）中，所述叶酸受体靶向和荧光双功能金簇与K 562 细胞孵育时间30 min。

7.根据权利要求1所述在步骤6）中，所述对叶酸受体靶向和荧光双功能金簇与叶酸过表达的K 562细胞进行孵育前后溶液在激发波长和发射波长分别为470 nm和650 nm下进行测定。