[发明专利]一种用于检测阴道加德纳菌的引物对、试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及疾病检测技术领域，尤其涉及阴道加德纳菌的检测，特别涉及一种用于检测阴道加德纳菌的引物对、试剂盒及其应用。

背景技术

生殖道感染（Reproductive Tract Infection，RTI）是指各种病源微生物和寄生虫感染于生殖道或是经生殖道感染的一组感染性疾病的统称，包括内源性、外源性、医源性及性传播等感染，该病主要发生于生育期。生殖道感染疾病危害性涉及到诸多方面，表现在：（1）危害人类生殖健康，所导致的严重后果包括慢性盆腔炎疼痛、男女不孕症、宫外孕、异位妊娠和感染HIV风险增加等。（2）RTI还会对新生儿的健康带来影响，很多性传播疾病（如梅毒、淋病、衣原体、乙肝、人类乳头状瘤病毒、单纯疱疹病毒和艾滋病毒）可以通过妇女的怀孕期、分娩期和哺乳期传给孩子，这被称为“垂直传播”，给婴儿的健康造成严重后果。另外RTI也会引起自然流产、胎膜早破、早产和由此产生的低出生体重以及死胎。当孕妇为淋病患者时，多达35％的妊娠结果为自然流产和早产，多达10％为围产儿死亡。当孕妇衣原体未经治疗，新生儿先天性感染几率为30％，每年有数千名新生儿因此而失明。（3）生殖道感染疾病影响避孕节育的安全性。（4）生殖道感染还可增加宫颈癌发生的危险。（5）生殖道感染会增加多种疾病混合感染的危险，例如淋病患者感染衣原体、支原体的概率为非感染者的3-5倍。RTI带来这些严重的后果，对男性、女性个人和他们的家庭乃至整个社区造成健康问题。在我国有生殖感染症状的育龄妇女比例高达34.1%，已婚育龄妇女的既往生殖感染率高达73％，同时生殖感染疾病发病率目前也正以30%的速度逐年增长。

妇女RTI疾病严重影响人类生殖健康，随着RTI发病率的上升，经济生产率受到影响，很多家庭的生活质量下降，RTI已经成为当今人类面临的重大社会问题。

阴道加德纳菌（Gardnerellavaginalis，GV）是RTI常见的病原体和女性细菌性阴道炎（BV）的主要病原体。细菌性阴道炎是育龄妇女一种常见的临床症候群，以下生殖道微生物菌群的变迁为主要特征，表现为占绝对优势的乳酸杆菌被具有潜在致病作用的高浓度GV以及相关的微生物所代替。GV可经性传播，不仅可以引起阴道炎和尿道炎，还可引起盆腔炎、异常子宫出血和子宫内膜炎、羊膜和绒毛膜炎、羊水感染、胎膜早破和早产、低出生体重儿、产后感染和子宫颈癌，而且与HIV的的传播增高率有关。

目前对GV的实验诊断主要以直接涂片寻找线索细胞（染色法）、胺试验、分离培养法、气相色谱法、免疫荧光法、聚合酶链反应技术以及分子杂交探针法等。后三种方法要求特殊实验设备及技术，一般难在普通实验室推广。革兰氏染色法受显微镜，标本采集以及操作者的经验等诸多因素影响，主观性强；胺试纸法检测灵敏度不但比革兰氏染色法低，而且比临床检测也低，加上胺试纸的稳定读取时间较短，不适合在临床上使用；阴道加德纳菌厌氧，对营养要求高，分离培养耗时长，培养困难；气相色谱法操作繁琐，试验成本较高。有报道用酶标葡萄球菌A蛋白来检测血清中加德纳菌抗体，阳性率偏低；酶测定法（脯氨酸氨基肽酶是BV的特异性标志酶）特异性较低。已有报道，克隆表达vaginolysin（简写VLY，加德纳菌细胞质的特异性抗原），纯化后免疫动物获得多克隆抗体，建立ELISA方法来检测阴道加德纳菌，虽然这方法灵敏性高，但多克隆抗体特异性不是很高。

GV已被确认是女性BV的重要病菌，与输卵管妊娠、胎膜早破和新生儿早产等不良妊娠结局以及女性间质性膀胱炎等关系密切。近年来，随着社会发展、人们生活环境和传统文化观念的改变等因素，性病病原体感染率增加，BV发病率有逐年增高的趋势，所以建立快速、灵敏、准确地从临床标本中直接检阴道加德纳菌，对于BV的早期诊断、治疗和控制有重大意义。

自上世纪80年代起，分子生物学研究的不断深入，PCR技术开始广泛应用于微生物领域，该技术灵敏度好、特异性高，操作简单、快速，很大程度上缩短了诊断时间。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明人通过PCR方法确定了一段阴道加德纳菌的保守序列，通过检测该段保守序列能够检测阴道加德纳菌的感染，所述保守序列具有SEQ ID NO：1所示的序列。因此，本发明的目的在于提供一种用于检测阴道加德纳菌的引物对，包括所述引物对的PCR检测试剂盒及其应用。使用本发明提供的阴道加德纳菌的特异性引物对能够快速、灵敏、准确地从临床样品中检测阴道加德纳菌，这对于早期诊断、及时治疗和有效控制生殖道阴道加德纳菌感染极有意义。