[发明专利]一种甲型流感病毒胶体金诊断检测试纸及其制备方法

权利要求书

1.一种甲型流感病毒胶体金诊断检测试纸，包括试纸壳和试纸条，其特征在于，试纸条装在试纸壳(8)内，试纸条由样品垫(1)、胶体金垫(2)、反应膜(4)和背衬(7)构成，背衬(7)中部粘贴有反应膜(4)，反应膜(4)上喷涂有检测线(3)和对照线(5)，背衬(7)尾部粘贴有吸水垫(6)，吸水垫(6)一端扣压在反应膜(4)一端上，背衬(7)上部粘贴有胶体金垫(2)，胶体金垫(2)一端扣压在反应膜(4)另一端上，靠胶体金垫(2)一端的背衬(7)头部粘贴有样品垫(1)，样品垫(1)一端扣压在胶体金垫(2)另一端上。

2.权利要求1所述的甲型流感病毒胶体金诊断检测试纸的制备方法，其特征在于，首先将反应膜(4)粘贴到背衬(7)上，再将吸水垫(6)压到反应膜(4)靠近背衬末端的一侧，胶体金垫(2)压到反应膜(4)的另一侧，样品垫(1)压到胶体金垫(2)的另一侧，样品垫、胶体金垫、反应膜和吸水垫皆用强力胶固定于背衬上，当整个背衬按要求都贴好后，用切条机沿背衬横截面方向切成4mm宽的条，即成甲型流感病毒胶体金诊断检测试纸；

所述的样品垫(1)由样品处理液和玻纤膜构成，每1000ml样品处理液中含有20g牛血清白蛋白、5g曲拉通-100和0.01mol、pH为7.4的磷酸缓冲液，其余为水制成，把玻纤膜裁切成22mm宽的条，每100μL样品处理液喷涂0.8cm长的玻纤膜，37℃干燥过夜，得样品垫(1)；

所述的胶体金垫(2)包括玻纤膜和金标抗体液，将玻纤膜裁切成7mm宽的条，每100μL金标抗体液喷涂1.7cm长的玻纤膜，冷冻真空干燥或加入干燥剂自然凉干，然后静置密闭容器平衡12小时，即成胶体金垫(2)；

金标抗体液的制备： 

  1）胶体金稀释液的配制：每1000ml胶体金稀释液中含有10g牛血清白蛋白、25g蔗糖、0.5g吐温-20、1g叠氮钠和0.01mol、pH为7.4的磷酸缓冲液，其余为水制成；

  2）胶体金颗粒溶液的配制：取质量浓度为0.01%氯金酸水溶液50ml，微波加热至煮沸，加入质量浓度为1%柠檬酸三钠水溶液600μL，加热至出现酒红色，再加入50ml、4℃预冷的电导率为18.25的纯净水，即成40nm胶体金颗粒溶液，胶体金颗粒溶液吸收峰波长为532-534nm；Abs大于0.400；

    3）胶体金标记抗体的配制：取胶体金颗粒溶液10ml，磁力搅拌条件下，加入体积浓度为30%的双氧水水溶液32μL；室温磁力搅拌混合10min后，加入0.2M的碳酸钾水溶液300μL，室温磁力搅拌混匀10min后，加入0.2mg纯化冻干的抗流感病毒单克隆抗体A1-6，抗流感病毒单克隆抗体A1-6冻干前缓冲液为0.01M，pH7.4的磷酸缓冲液；室温磁力搅拌混匀60min后，加入0.1g牛血清白蛋白，室温磁力搅拌混匀10min后，加入0.01g聚乙二醇6000，室温磁力搅拌混匀30min，得金标抗体，将金标抗体移入离心管，在4℃，用Himac CR21G离心机浓缩，8000rpm,离心10min，弃去上清，酒红色沉淀即为胶体金标记抗体；

    4）金标抗体液的配制：胶体金标记抗体用胶体金稀释液溶解以置换溶液体系，然后用胶体金稀释液稀释金标抗体，稀释后的金标抗体标准为：最高吸收峰波长范围532-534nm；OD大于0.400Abs；                            

    所述的检测线(3)和对照线(5)分别是由检测抗体点膜液、对照抗体点膜液喷涂在反应膜(4)上构成：

    1）点膜稀释液配制：是由0.01mol/L、pH为7.4的磷酸缓冲液，0.15mol/L氯化钠，10mol/L乙二胺四乙酸，1g/L叠氮钠，30g/L的甲醇，余量为水制成；

    2）检测抗体点膜液配制：将纯化冻干的抗流感病毒单克隆抗体H1-24用点膜稀释液稀释至2mg/mL，抗流感病毒单克隆抗体H1-24纯度大于90%，比活性大于10^-5效价/mg蛋白；

    3）对照抗体点膜液配制：将比活性大于10^-7/mg的山羊抗小鼠多抗用点膜稀释液稀释至0.8mg/mL；

4）检测线和对照线的制备：先将反应膜贴到背衬的相应位置，再用点膜机将检测抗体点膜液及对照抗体点膜液划到反应膜上的相应位置，检测线和对照线的喷制均按每厘米检测线用2μL点膜液喷制，室温晾干，即成；所述的反应膜(4)的材质是硝酸纤维素膜，型号为：MILLIPORE, M135，制备时将反应膜裁切成宽度为25mm的条；   

  所述的吸水垫(6)的材质是加厚吸水纸，将加厚吸水纸裁切成宽度为26mm的条，然后将其粘贴到背衬相应位置上即可。