[发明专利]一株耻垢分枝杆菌极耐受过氧化氢突变菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一株耻垢分枝杆菌极耐受过氧化氢突变菌及其应用。

背景技术

结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,M.tb）是结核病的致病菌。活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）在结核分枝杆菌潜伏感染、耐药性和宿主之间的相互作用中起着非常重要的作用。过氧化氢（H₂O₂）是活性氧中的一种重要形式。耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis,M.smegmatis）与结核分枝杆菌同属于分枝杆菌科分支杆属，是一种条件致病菌。基因上的大量同源性与生长优势均使得M.smegmatis成为研究M.tb首选的模式菌株。由于巨噬细胞内H₂O₂的生理浓度为5-10mM，在长期的共进化中，M.tb天然的抗H₂O₂，而作为研究M.tb的模式菌株M.smegmatis mc²155相对于M.tb对H₂O₂敏感，M.smegmatis几乎能够完全被清除而M.tb能够部分潜伏下来，可能与他们的抗H₂O₂能力有关。

发明内容

本发明的目的是提供一株耻垢分枝杆菌极耐受过氧化氢突变菌及其应用。

本发明提供了耻垢分枝杆菌Mycobacterium Smegmatis mc²51，其保藏号为CGMCC.NO8947。

上述耻垢分枝杆菌mc²51在制备具有抗氧化性产品中的应用也是本发明保护的范围。

上述耻垢分枝杆菌mc²51在制备耐受H₂O₂的产品中的应用也是本发明保护的范围。

上述耻垢分枝杆菌mc²51在制备耐受巨噬细胞吞噬的产品中的应用也是本发明保护的范围。

上述产品为试剂盒。

本发明的另一个目的是提供一种具有抗氧化性或耐受H₂O₂或耐受巨噬细胞吞噬的产品。

本发明提供的产品，包括上述的耻垢分枝杆菌mc²51或其发酵产物或其重悬液或其代谢产物或其培养液。

耻垢分枝杆菌Mycobacterium Smegmatis mc²51，于2014年3月21日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号），保藏编号为CGMCC NO.8947，分类命名为耻垢分枝杆菌Mycobacterium smegmatis。

本发明的实验证明，本发明筛选耐H₂O₂耻垢分枝杆菌Mycobacterium Smegmatis mc²51，并且测定突变株对H₂O₂的最小抑菌浓度（MIC）、世代时间、在宿主细胞中的存活率、在饥饿条件下的生长情况以及对巨噬细胞生理H₂O₂浓度的反应来鉴定此突变株的表型。另外，对此突变菌株进行了全基因组测序，与野生型全序列比对，找到若干突变位点（SNPs，单核苷酸多态性）。因此，该突变菌株是研究分枝杆菌应答过氧化氢分子机制很好的对象，进而为解释结核分枝杆菌潜伏感染以及耐药机制提供理论依据，为疫苗的研发提供基础。与野生型相比，突变株极耐受过氧化氢，生长速度变慢，在宿主细胞中的存活率增高，在饥饿条件下有生长优势，这些表型都与病原菌结核分枝杆菌相似，其表型更像结核分枝杆菌，使得其可能作为可行的活疫苗载体。

附图说明

图1为耻垢分枝杆菌Mycobacterium Smegmatis mc²51的菌落形态。

图2为突变菌株mc²51对H₂O₂的最小抑菌浓度。

图3为突变菌株mc²51过氧化氢处理点板实验。

图4为突变菌株mc²51世代时间、starvation点板以及Macrophage killing assay。

具体实施方式