[发明专利]一种过敏原阳性血清的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于体外诊断技术领域，具体涉及一种过敏原阳性血清的制备方法。

背景技术

过敏是一种机体的变态反应，是人对正常物质（过敏原）的一种不正常的反应，当过敏原接触到过敏体质的人群才会发生过敏，过敏原有花粉、粉尘、异体蛋白、化学物质、紫外线等几百种。在过敏反应的发生过程中，过敏介质起着直接的作用，过敏原是过敏病症发生的外因，而机体免疫能力低下，大量自由基对肥大细胞和嗜碱粒细胞的氧化破坏是过敏发生的内因。一般来讲，当过敏原第一次进入机体时，与肥大细胞或者是嗜碱性粒细胞结合，产生白三烯，前列腺素等等的过敏因子，但并不会立即产生过敏，此特性有些将维持2～3天，有的数月。当机体第二次接受这种过敏原时，肥大细胞才会变形，产生过敏因子，也就产生了一系列的过敏现象。

过敏可以是体液（抗体）或者是细胞免疫机制介导的。在大多数情况下，可产生过敏反应的抗体属于IgE类，这些个体可以归类于患有IgE-介导的过敏反应。然而，并非所有的特异反应性个体都会发生与IgE相关的过敏反应；在非-IgE-介导的过敏反应中，抗体也可以属于IgG一类，例如：包含右旋糖苷的免疫复合物导致的过敏性休克和和现在罕见的血清病，它们以前被归于三型过敏反应。在患有过敏性支气管肺曲霉菌病（ABPA）病人中，IgE和IgG抗体都可以被检出。接触性过敏性皮炎是以淋巴细胞为介导的过敏性疾病的代表。IgE检测仍是公认的过敏检测的主流产品，由于点刺注册问题和体外检测技术的提高，体外检测今后将是过敏检测主流趋势；但是目前IgE检测学术进展迟缓，基本没有新的发展，因此提高检测质量和降低检测成本是主要开发方向。

但是，由于过敏诊断试剂的发展缓慢以及前期人们的重视度有限，除了部分过敏原可以购买到商业血清，大部分过敏原的阳性血清还是很难查询到的，临床收集少量可行，大量或者高浓度的血清基本不能收集到。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种可批量生产的过敏原阳性血清的制备方法。

为解决以上技术问题，本发明采取如下技术方案：

一种过敏原阳性血清的制备方法，包括依次进行的如下步骤：

步骤1、用自身免疫抗原对健康动物进行多次免疫，每次所述免疫之前，对所述健康动物进行取血测定OD值，当OD值稳定后，免疫结束，进行取血，获得抗血清；

步骤2、对步骤1所得的抗血清进行亲和纯化得到IgG抗体；

步骤3、将步骤2所得的IgG抗体和人IgE抗体按质量比为1:1～2偶联后，经分离纯化获得IgG-IgE连接物浓溶液，将所述的IgG-IgE连接物浓溶液稀释至浓度为0.5～1μg/ml，即得所述的阳性血清。

优选地，所述的健康动物为兔子。

优选地，步骤1中，每次免疫时所采用的所述的过敏原的质量为2～60mg。

优选地，步骤1中，先将所述的过敏原配置成浓度为4～8mg/ml的过敏原溶液，按所述的过敏原溶液与弗氏完全佐剂的体积比为1～1.5:1配置成乳液进行首次免疫；按所述的过敏原溶液与弗式不完全佐剂的体积比为1～1.5:1配置成乳液进行后续免疫。

优选地，所述的免疫次数为6～8次，每两次免疫的间隔时间为12～36天。

优选地，步骤1中，取血时采用耳缘静脉取血。

优选地，采用蛋白A sepharose CL-4B亲和柱进行所述的亲和纯化。

优选地，步骤3中，所述的IgG抗体和所述的人IgE抗体分别通过所述的2-亚胺四氢噻吩偶联剂和4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯偶联剂活化后，在2～8℃下进行偶联。

优选地，步骤3中，采用Supperdex200凝胶纯化柱进行所述的分离纯化。

优选地，步骤3中，采用含质量比为0.4～6%的牛血清白蛋白、pH7.5～8.5、0.09～0.11mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液将所述的IgG-IgE连接物浓溶液进行所述的稀释。

由于以上技术方案的实施，本发明与现有技术相比具有如下优点：

本发明方法可批量制备各种过敏原的阳性血清，解决了检测试剂盒制备过程中的阳性质控问题，也可以作为校准品的生产原料，并且本制备方法简单易行。

附图说明

附图1为经蛋白A sepharose CL-4B亲和柱纯化的兔抗牛肉IgG蛋白条带。

具体实施方式