[发明专利]试剂盒及确定待测DNA样本预定SNP位点的基因型的方法

权利要求书

1.一种试剂盒，其特征在于，包括：

第一核酸分子，所述第一核酸分子具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；

第二核酸分子，所述第二核酸分子具有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；

第一探针，所述第一探针具有SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列；以及

第二探针，所述第二探针具有SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列，

其中，

所述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团，

所述第一探针与所述第二探针的荧光报告基团不同。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光报告基团为FAM或VIC，所述淬灭基团为MGB。

3.一种确定待测DNA样本预定SNP位点的基因型的方法，所述预定SNP位点为VKORC1基因的rs9923231位点，其特征在于，包括：

根据Taqman探针杂交法，利用权利要求1或2所述的试剂盒，将所述待测DNA样本进行荧光定量PCR；以及

对荧光定量PCR结果进行分析，以便确定待测样本预定SNP位点的基因型。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，利用荧光定量PCR仪，优选ABI Stepone荧光定量PCR仪进行所述荧光定量PCR。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述荧光定量PCR的反应体系为：

5重量份的Taqman Genotyping Master Mix；

3.5重量份的超纯水；

0.5重量份的组合物；以及

1重量份的待测DNA样本，

其中，所述组合物由所述第一核酸分子、第二核酸分子、第一探针和第二探针组成。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述待测DNA样本的浓度为20ng/μl。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述待测DNA样本来源于人唾液或外周血。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述组合物中每种核酸分子的浓度均为18μmol/L，每种探针的浓度均为5μmol/L。

9.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述荧光定量PCR的反应程序为：

第一步：60℃下保持30秒；

第二步：95℃下保持10分钟；

第三步：92℃下保持15秒；

第四步：60℃下保持90秒；

第五步：循环第三步第四步50次；以及

第六步：60℃下保持30秒。

10.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，利用Stepone software V2.1对所述荧光定量PCR结果进行分析。