[发明专利]柑桔接穗预处理促使复合感染病原脱除的技术

说明书

技术领域

本发明属于无病毒良种繁育技术领域，涉及柑桔接穗预处理促使复合感染病原脱除的技术。

背景技术

柑桔脱毒技术是实现无病毒良种繁育的关键环节，是果树栽培、育种及引种推广领域中必备的配套技术。伴随着气候变化及国内外柑桔品种引进和交流的增多，柑桔病毒及类似病毒的感染日趋严重，复合感染情况加剧，因此，研究新型、高效、实用的柑桔脱毒技术具有重要的实际应用价值。

1.柑桔病毒及类似病毒病的危害：柑橘种植面积和产量逐年增加，在栽培过程中，柑橘多采用无性繁殖，往往易感染一种或几种病毒，病毒的危害已成为制约柑橘产业发展的主要障碍。柑橘黄龙病（Huanglongbing，HLB）是我国重大的植物检疫性病害，是当前柑橘生产上来势最凶、波及面最广、防治最难的传染性和毁灭性病害（Bové，2006；Grafton-Cardwell et al.，2013）。柑桔木虱是柑桔黄龙病重要的传播媒介。HLB由一种特殊的韧皮部杆菌引起，同行研究认为：HLB病原菌Candidatus Liberibacter是一种革兰氏阴性菌，属于变形细菌门（Proteobacteria），α-变形细菌亚纲（Alpha-Proteobacteria）。它侵染主要的柑橘主栽品种和近缘属植物，它可以通过菟丝子传播给指示植物长春花及一些敏感的植物，如：烟草和番茄等非芸香科植物。通过16SrDNA序列分析证明，韧皮部杆菌与木豆丛枝病植原体的相似性达到99％（Teixeira et al.，2008），在世界范围内，柑橘黄龙病迅速蔓延，迄今为止，尚没有一种能根除柑橘黄龙病的有效方法，在柑橘品种资源中也未发现完全抗病的品种。受全球性暖冬气候影响，传病虫媒越冬逐年北移，带病（虫）柑桔种苗的引种增多而导致该病发生面积有逐年扩大的趋势。柑桔衰退病(Citrus tristeza virus，CTV)，是世界性的柑桔病毒病害，广泛分布于世界各柑桔产地，对全世界柑桔产业造成了严重的威胁。最早它是在南美洲的阿根廷和巴西发现的，先后有50多个国家和地区有此病的发生，20多个国家将其列为检疫对象。在我国福建、浙江及广东等柑桔主要产区分布相当普遍。此外，柑橘黄龙病和柑橘衰退病复合感染现象日益严重。

2.HLB的防治和检测：注射农用四环素曾经被用于防治黄龙病，在田间缓解症状，恢复产量有一定的作用，但是，成本过高，在我国广西省，及时清除病株减少病原，采用联防的措施，HLB的控制产生了良好的效果。在巴西，通过清除病株和使用杀虫剂控制木虱，黄龙病的防治已经取得一定的成果（Bové，2006）。另外，选用相对抗性强的品种、加强柑桔木虱防治、推广无毒苗木、间种番石榴趋避木虱等园艺手段，也是可以减少黄龙病的为害（Morgan et al.，2009）。但是，在大规模的新建果园，采用无病毒苗木仍是至关重要的方法。目前，柑橘黄龙病PCR检测主要根据16SrDNA和β-操纵子设计引物进行（Bove and Ayres2007），实时定量PCR也被广泛应用于柑橘黄龙病的检测（Li et al，2008；Deng et al，2008），灵敏度高，准确性高，对于田间感病状况能快速地监控。

3.柑桔无病毒良种繁育的重要性：各级政府十分重视优良品种的引进和推广，先后投入许多资金从国外引进各类柑橘优良品种。但是无病毒工厂化育苗系统有限的使用，大大影响了新品种的推广速度。传统的柑橘品种育苗主要是在大田中进行操作，由于苗木管理制度不完善，果农自繁自育的现象普遍，这样，不能保证品种的健康、纯正和苗木质量。建立无病毒苗木繁育体系，采用工厂化育苗方法是解决柑橘品种结构调整中优良种苗供不应求问题的关键手段。欧美各国早在上世纪80年代，就开始研究果树的脱毒技术，获得了一大批无病毒苗木。90年代以来，又着重开展果树良种繁育体系建设，推行果树无病毒化栽培。