[发明专利]一种防治杨树溃疡病的木贼镰孢菌株及其应用

说明书

技术领域：

本发明涉及植物保护领域，尤其涉及一种防治杨树溃疡病的生防菌菌株及其应用，具体地说涉及一种高效防治杨树溃疡病生防菌株木贼镰孢CGMCC8795及应用。

技术背景：

杨树及其杂交品种在世界范围内都有广泛的分布，它不仅可作为人造板及纤维用材的重要加工原料，而且对植树造林、生态恢复、风景绿化和防风固沙都有着重要的作用。杨树溃疡病(有性型病原菌Botryosphaeria dothidia，无性型聚生小穴壳菌Dothiorella grearia)是中国杨树干部病害中的主要类型，在中国华北、西北及南方杨树栽培区均有分布，在杨树幼林上发生较多，危害严重，一般在感病品种上发病率高达80％～100％，死亡率达30％～50％。杨树溃疡病是中国杨树人工林重大生物灾害之一，严重制约了杨树人工林的发展。

目前对杨树溃疡病的防治主要通过调整杨树林生态系统空间结构及物理和化学方法来完成。但生态系统空间结构调控是一个相对较长的过程，而化学防治对于环境的污染和破坏已成为不容忽视的问题。在人们愈来愈关注环境安全的情况下，对杨树溃疡病的防治也提出了越来越高的安全要求。随着社会经济的发展和人们环境保护意识的增强以及生物防治技术的愈加成熟，用生物防治的方法来可持续治理杨树溃疡病变得更加可行。

从杨树林土壤中分离筛选获得对杨树溃疡病病菌具有拮抗作用的生防菌株，并研制菌株相关活菌剂，对杨树溃疡病的防治具有重要的意义。

发明内容：

本发明的目的是提供一种高效防治杨树溃疡病的木贼镰孢，该菌株于2014年3月4日保存在北京市朝阳区北辰西路1号院3中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种编号为CGMCC8795。木贼镰孢CGMCC8795是一种从杨树林土壤中分离筛选获得对杨树溃疡病病菌具有拮抗作用的生防菌株，对杨树溃疡病的防治具有重要的意义。

本发明另一个目的是提供所述高效防治杨树溃疡病的木贼镰孢CGMCC8795在防治杨树溃疡病方面的多种应用。

本发明的技术方案是提供一种高效防治杨树溃疡病的木贼镰孢CGMCC8795，在PDA培养基上，CGMCC8795菌株菌落呈圆形或椭圆形，气生菌丝初期为白色，绒毛絮状，质地较为疏松，和培养基结合不是很紧密，易挑取，生长率为6.89mm/d，培养后期表面具有浅橙黄色孢子堆。菌丝有隔，少分支。分生孢子梗分枝或在菌丝上直接形成产孢细胞，小型分生孢子极少。大型分生孢子略弯，顶细胞延长成钩状，多为3～6个分隔，大小约为(21.57～44.62)μm×(3.21～5.04)μm，但孢子堆内的大型分生孢子多为5～7个分隔，大小为(52.38～62.15)μm×(3.85～5.43)μm。对菌株CGMCC8795的ITS基因序列进行PCR扩增，产物纯化后测序。测得菌株CGMCC8795的序列长度为563bp。通过分析发现CGMCC8795菌株与编号为AB425996.1的木贼镰孢相似度高达100％，亲缘关系最近，同源性很高。综合菌株的形态学特征以及分子鉴定结果，确定CGMCC8795菌株为木贼镰孢(Fusarium equiseti)。本发明所述高效防治杨树溃疡病的木贼镰孢CGMCC8795通过平板对峙试验、发酵液复筛及离体组织试验筛选获得。

本发明还提供了所述高效防治杨树溃疡病的木贼镰孢CGMCC8795在防治杨树溃疡病上的应用，并且可以用于制备防治植物病害的制剂。

所述的防治杨树溃疡病的制剂的制备过程如下：

(1)先将菌株液体发酵：发酵条件为：接种量为4％，装液量100mL/250mL，初始pH值7.0，温度32℃，转速180r/min，发酵时间96h；发酵培养基为：土豆浸汁200g/1000mL，果糖1％，牛肉浸粉1.4％，KCl0.1％。

(2)固体发酵：选用50％玉米粉与50％麦麸混合作为固体发酵基质，发酵条件为10％接种量，50％的含水量，培养温度为30℃。

(3)菌剂制备：将固体发酵物自然风干后碾碎制成原粉；添加42wt％原粉，36wt％高岭土，12wt％吐温20，8wt％拉开粉，2wt％抗坏血酸制成菌剂。

所述的菌剂还可以经过稀释后，直接以喷洒和灌根的方式用于防治杨树溃疡病。所述的菌剂稀释100-1000倍。

本发明的有益效果是：

(1)木贼镰孢CGMCC8795对杨树溃疡病病原菌具有拮抗作用，而且具有对病原菌的作用方式多种多样、繁殖速度快、作用效果稳定等优点，在杨树溃疡病生物防治中所起到的作用非常重要；