[发明专利]一种防治杨树溃疡病的生防菌菌株及其应用

说明书

技术领域：

本发明涉及植物保护领域，尤其涉及一种防治杨树溃疡病的生防菌菌株及其应用，具体地说涉及一种高效防治杨树溃疡病生防菌株黄绿木霉CGMCC8891及应用。

技术背景：

作为人造板及纤维用材的重要加工原料，各品种杨树及其杂交品种在世界范围内都有广泛的分布。此外，杨树对植树造林、生态恢复、风景绿化和防风固沙都有着重要的作用。杨树容易感染多种病害，其中杨树溃疡病是我国杨树人工林重大生物灾害之一，严重制约了杨树人工林的发展。这种病害主要是由葡萄座腔菌属(Botryosphaeria spp.)等真菌引起的。杨树溃疡病可以造成杨树幼苗的死亡以及妨碍杨树的正常生长，严重影响杨树人工林成材，制约我国林业、工业建设及生态恢复的稳定发展。该病在我国东北、华北、华东和西北等地均普遍发生，造成育苗和造林的失败，经济和生态损失惊人，严重地区林木的发病率高达96.1％～100％，感病指数达6.7％～95.8％。

目前对杨树溃疡病的防治主要通过加强抚育管理以及物理和化学方法来实现。但化学防治对于环境的污染和破坏已成为不容忽视的问题。人们愈来愈关注自己的生存环境，对病虫害的防治提出了越来越高的安全要求。随着社会经济的发展和人们环境保护意识的增强，用生物防治的方法治理杨树溃疡病极有可能成为一种更为人接收的有效方法。

从杨树组织中分离筛选获得对杨树溃疡病病菌具有拮抗作用的生防菌株，并将其研制称为活菌制剂，对杨树溃疡病的防治具有重要的意义。

发明内容：

本发明的目的是提供一种高效防治杨树溃疡病的黄绿木霉菌株。该菌株于2014年3月4日保存在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC8891。黄绿木霉CGMCC8891是一种从杨树组织中分离筛选获得的对杨树溃疡病病菌具有拮抗作用的生防菌株，对杨树溃疡病的防治具有重要的意义。

本发明另一个目的是提供所述高效防治杨树溃疡病的黄绿木霉CGMCC8891在防治杨树溃疡病方面的多种应用。

本发明的技术方案是提供一种高效防治杨树溃疡病的黄绿木霉CGMCC8891，在PDA平板上，菌落初期为白色，后期在菌落中间有一圈明显的产孢区，颜色为深绿色、浅绿或黄绿。菌丝有隔，分生孢子梗分枝多。孢子较小，球形，经常附着在菌丝周围。通过形态学特征初步分析判定CGMCC8891菌株为绿霉属真菌。对菌株CGMCC8891的ITS基因序列进行PCR扩增，产物纯化后测序。测得菌株CGMCC8891的序列长度为649bp。通过分析发现CGMCC8891菌株与编号为HQ596956的黄绿木霉聚为一支，相似度为99％，亲缘关系最近，同源性很高。综合菌株的形态学特征以及分子鉴定结果，确定CGMCC8891菌株为黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)。本发明所述高效防治杨树溃疡病的黄绿木霉CGMCC8891通过平板对峙试验、发酵液复筛及离体组织试验筛选获得。

本发明还提供了所述高效防治杨树溃疡病的黄绿木霉CGMCC8891在防治杨树溃疡病上的应用，并且可以用于制备防治植物病害的制剂。

所述的防治杨树溃疡病的制剂的制备过程如下：

(1)先将菌株液体发酵：发酵条件为：接种量为3.5％，装液量100mL/250mL，初始pH值7.0，温度34℃，转速190r/min，发酵时间96h；发酵培养基为：土豆浸汁200g/1000mL，果糖1％，牛肉浸粉1.4％，KCl0.1％；

(2)固体发酵：选用50％玉米粉与50％麦麸混合作为固体发酵基质，发酵 条件为20％接种量，30％的含水量，培养温度为30℃。

(3)菌剂制备：将固体发酵物自然风干后碾碎制成原粉；添加38wt％原粉，38wt％高岭土，13wt％木质素磺酸钠，8.5wt％SDS，2.5wt％腐植酸制成菌剂。

所述的菌剂还可以经过稀释后，直接以喷洒和灌根的方式用于防治杨树溃疡病。所述的菌剂稀释100～1000倍。

本发明的有益效果是：

(1)黄绿木霉CGMCC8891对杨树溃疡病病原菌具有拮抗作用，而且具有对病原菌的作用方式多种多样、繁殖速度快、作用效果稳定等优点，在杨树溃疡病生物防治中所起到的作用非常重要；

(2)该种菌株培养条件简单，容易保存，易于工业化生产，具有良好的开发应用前景。

附图说明：

图1为黄绿木霉CGMCC8891菌株菌落形态图

图2为黄绿木霉CGMCC8891菌株菌丝形态图