[发明专利]蝇蛆抗菌肽佐剂及其制备方法和含该佐剂的疫苗制剂及用途

说明书

技术领域

本发明涉及从蝇蛆提取分离的具有免疫佐剂作用的蝇蛆抗菌肽，及其制备方法和含该抗菌肽佐剂的疫苗制剂，以及它们在制备疫苗制剂中的应用。

背景技术

疫苗接种是预防和控制传染性疾病最经济、有效的手段。DNA疫苗、重组疫苗和合成肽疫苗等新型疫苗是近年来发展迅速的一类生物制剂，比常规疫苗具有抗原纯度高、特异性强、安全性好等优势。然而，这些新型疫苗的免疫原性弱，免疫效力低下[Oyston P, Robinso K. The current challenges for vaccine development. J Med Microbiol 2012; 61(7): 889–894]。同此，当前疫苗研究正面临一些复杂病原如疟疾、结核、人免疫缺陷病毒等的重要挑战[Leroux–Roels G. Unmet needs in modern vaccinology: Adjuvants to improve the immune response. Vaccine 2010; 28(Supp. 3): C25–36]。佐剂是传统疫苗和当前新型疫苗必不可少的组成成分，不仅能影响机体对疫苗免疫应答的强度，而且能针对特定病原体诱导最有效的免疫应答类型[Mbow ML, De Gregorio E, Valiante NM, et al. New adjuvants for human vaccines. Current Opinion in Immunology 2010; 22(3): 411–416]。目前研究的免疫佐剂种类很多，如油佐剂、弗氏佐剂、微生物及其代谢产物、核酸及其类似物、细胞因子、脂质体等[Dey AK, Srivastava IK. Novel adjuvants and delivery systems for enhancing immune responses induced by immunogens. Expert Rev Vaccines 2011; 10: 227–51]，但由于存在不同程度的毒副作用或安全隐患等一些不可避免的缺陷而难以实际应用[Mbow ML, De Gregorio E, Valiante NM, Rappuoli R. New adjuvants for human vaccines. Curr Opin Immunol 2010, 22(3): 411–6; Batista–Duharte A, Lindblad EB, Oviedo–Orta E. Progress in understanding adjuvant immunotoxicity mechanisms. Toxicol Lett 2011; 203(2): 97–105]。铝胶佐剂自1920s使用以来，直至最近由铝盐和TLR4激动剂3–O–去酰基–4’–单磷酰脂质A组成的AS04被批准之前一直是唯一通过FDA批准的人用疫苗佐剂[Marrack P, McKee AS, Munks MW. Towards an understanding of the adjuvant action of aluminium. Nat Rev Immunol 2009; 9: 287–293]。然而，铝胶佐剂存在一些弊端：① 主要通过诱导Th2型免疫应答产生抗体起保护作用，不能诱生Th1型免疫应答和细胞介导的免疫反应，只适用于以抗体为主要保护性免疫的疫苗(Exley C, Siesjo P, Eriksson H. The immunobiology of aluminium adjuvants: how do they really work? Trends Immunol 2010; 31: 103–109)；② 对人免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、流感病毒以及血吸虫病、百日咳和伤寒等多种抗原无佐剂作用[O’Hagan DT, De Gregorio E. The path to a successful vaccine adjuvant- ‘the long and winding road’ . Drug Discov Today 2009; 14: 541–551]；③ 可促进IgE抗体产生，容易诱导机体产生过敏反应；④ 在局部形成肉芽肿，甚至发生局部无菌性脓肿；⑤ 因其理化性质特点，含铝胶的疫苗怕冻，冻后铝胶容易变性；⑥ 对人、畜神经系统可能有影响。因此，铝胶佐剂已远远不能满足新型疫苗发展的要求[Kool M, Fierens K, Lambrecht BN. Alum adjuvant: some of the tricks of the oldest adjuvant. J Med Microbiol 2012; 61(7): 927–934]。寻找安全、有效、新型的免疫佐剂是当前疫苗研究领域的一个热点[Schijns VEJC, Lavelle EC. Trends in vaccine adjuvants. Expert Rev Vaccines 2011; 10(4): 539–550]。免疫佐剂研究已被列为疫苗研究的优先领域[Harandi AM, Medaglini D, Shattock RJ. Vaccine adjuvants: A priority for vaccine research. Vaccine 2010; 28(12): 2363–2366; Harand AM?, Brewe J, Schijn V. Conference Scene: Recent advancements in immunopotentiators for modern vaccines. Immunotherapy 2011; 3(11): 1297–301]。