[发明专利]一株草鱼鱼鳔上皮样细胞系及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及细胞学技术领域，特别涉及一株草鱼鱼鳔上皮样细胞系及其应用。

背景技术

草鱼(Ctenopharyngodon idellus)属鲤形目鲤科雅罗鱼亚科草鱼属，一种草食性鱼类，饲养成本低，养殖地域广，是我国淡水养殖的重要品种，除新疆、青藏高原外，在我国各地均有养殖，也是广东省的淡水主养品种之一。但是草鱼养殖期间易发生病害问题，其中以病毒性出血病最甚，对我国草鱼养殖业造成巨大损失。草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovims，GCRV)感染导致的草鱼出血病已经成为制约草鱼产业健康发展的重要因素之一。目前，对于草鱼出血病的防治，还没有特异有效的治疗药物和方法，最为有效的办法仍然是免疫预防。鱼类细胞系正是研究病毒感染途径、感染机理以及研制病毒疫苗的重要研究体系。因此，建立草鱼细胞系，是进行草鱼呼肠孤病毒的分离与鉴定，研究其致病机理，疫苗制备和免疫预防技术的重要基础。鱼类原代细胞系的建立技术目前是一种较为成熟的技术，但是要获得针对病毒敏感的细胞系仍存着很大的偶然性和困难性，所以建立一株需求鱼类细胞系有效的途径是以数量对质量，即制备大批量的原代细胞株，从而筛选出敏感的细胞系。

根据病鱼所表现的症状及病理变化，大致可以将草鱼出血病分为“红肌肉型”、“红鳍红鳃盖型”、“肠炎型”三种类型。  

    红肌肉型：病鱼外表无明显的出血现象，或仅表现轻微出血，但肌肉明显充血，有的表现为全身肌肉充血，有的表现为斑点状充血；红鳍红鳃盖型：病鱼的鳃盖、鳍条、头顶、口腔、眼腔等表现明显充血，有时鳞片下也有充血现象，但肌肉充血不明显，或仅局部表现为点状充血；肠炎型：其特点是体表和肌肉充血现象不太明显，但肠道严重充血，肠道全部或部分呈鲜红色，肠系膜、脂肪，鳔壁时有点状充血。学者研究表明，草鱼呼肠孤病毒GCRV的靶器官是肾，病毒感染导致鱼体免疫力下降，最终死亡。所以，大部分学者将目光放在靶器官细胞系的建立上，而忽视了鱼鳔。

迄今为止，已有草鱼肾脏细胞系、草鱼吻端组织细胞株ZC-7901及其亚株ZC-7901S1、吻端成纤维细胞系PSF、草鱼尾鳍组织二倍体细胞系、草鱼囊胚细胞系、肝细胞系等几个细胞系的文献报道，但是仍未见草鱼鱼鳔细胞系的报道。本发明对来源于草鱼的鱼鳔组织进行细胞培养，建立了草鱼鳔细胞系（命名为GSB, Grass carp Swimming Blander），并纯化出两株不同形态的细胞系GSB-E（上皮样细胞系）和GSB-F（成纤维样细胞系）。

发明内容

本发明的目的在于提供一株草鱼鱼鳔上皮样细胞系及其应用。

本发明所采取的技术方案是：

申请人于2014年3月1日将细胞系提交至位于湖北省武汉市武昌珞珈山的中国典型培养物保藏中心，保藏中心于2014年3月6日收到申请人提供的草鱼鱼鳔上皮样细胞系GSB-E，给予该培养物的保藏号为CCTCC No.C201443，并于2014年3月20日检测其存活。

保藏编号为CCTCC No.C201443的草鱼鱼鳔上皮样细胞系在在鱼类病毒的分离、繁殖及病毒疫苗研制中的应用。

保藏编号为CCTCC No.C201443的草鱼鱼鳔上皮样细胞系在草鱼呼肠孤病毒的分离、繁殖及草鱼出血病疫苗研制中的应用。

本发明的有益效果是：

本发明公开了一株保藏编号为CCTCC No.C201443的草鱼鱼鳔上皮样细胞系。草鱼呼肠孤病毒GCRV在该细胞系中的增殖量显著高于目前常用于分离GCRV的CIK、CO、PSF、FHM、EPC等细胞系，且细胞病变时间快，因此，该细胞系可很好地应用于草鱼呼肠孤病毒的分离、繁殖及草鱼出血病疫苗研究。

附图说明

图1为显微镜下观察传代培养的草鱼鱼鳔细胞系；

图2为透射电镜观察感染GCRV-JX-0901后的草鱼鱼鳔细胞系；

图3为GCRV-JX-0901在GSB-E中的增殖曲线。

具体实施方式

下面结合实施例，进一步阐述本发明内容。

实施例1 

1、制备细胞培养液

取GIBCO公司M199培养基，加入占培养基总体积10-20%（以下所述百分比若无特别说明，均为体积百分比）的胎牛血清，终浓度为20ng/ml的碱性成纤维生长因子（bFGF），终浓度为1ng/ml的表皮生长因子（EGF），4℃存放，备用。

2、原代培养