[发明专利]一种基于高通量检测的血小板聚集测定方法及在药物筛选中的应用

权利要求书

1.一种基于高通量检测的血小板聚集测定方法，该方法包括如下步骤：

a)提供具有活性的血小板样品；

b)用溶媒将血小板悬液稀释；

c)将稀释的血小板悬液转移至微孔板中；

d)将微孔板放置于37℃孵育5-30min；

e)微孔板的每孔加入刺激剂；

f)用酶标仪的动力学方法在一定波长下测定一定时间内各孔吸光度；每隔30s测定一次，测定前震动5s，首次测定不震动；

g)通过测定得到血小板聚集率。

2.如权利要求1所述的方法，其中步骤b所述的稀释血小板的溶媒包括：该血小板来源的血清、生理盐水或磷酸盐缓释液。

3.如权利要求1所述的方法，其中步骤b所述的血小板稀释后的浓度为2×10⁵-6×10⁵/μL。

4.如权利要求1所述的方法，其中步骤e所述的刺激剂包括：二磷酸腺苷、肾上腺素、胶原、花生四烯酸、凝血酶或凝血酶激活肽1。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述的二磷酸腺苷终浓度为1μM-10μM，肾上腺素终浓度为5μg/mL-10μg/mL，胶原终浓度为1μg/mL-10μg/mL，花生四烯酸终浓度大约为0.2mM-1mM，凝血酶终浓度为0.01U/ml-0.5U/ml，凝血酶激活肽1终浓度为0.5μM-20μM。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述的微孔板为透底的96孔板或384孔板，血小板悬液体积为30-300ul。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述的酶标仪动力学波长为390-770纳米。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述的酶标仪动力学方法测定一定时间为5-30min。