[发明专利]一种沉香结香菌种的筛选方法有效
申请号: | 201410134972.X | 申请日: | 2014-04-04 |
公开(公告)号: | CN103865813A | 公开(公告)日: | 2014-06-18 |
发明(设计)人: | 李海燕;杨洋;陈丽;张玉宜;刘瑞驹 | 申请(专利权)人: | 广东国方医药科技有限公司 |
主分类号: | C12N1/14 | 分类号: | C12N1/14;C12Q1/04;C12R1/645 |
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地址: | 523808 广东省东莞市松山湖高*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 沉香 菌种 筛选 方法 | ||
1.一种沉香结香菌种的筛选方法,其特征在于,按流程先后分为:接种、取样、以结香区浸出物含量、洞口染色面积与菌种定殖率三项指标筛选促进白木香结香的优势菌种。
2.根据权利要求1所述的一种沉香结香菌种的筛选方法,其特征在于:所述的真菌的接种方法为,首先选取树龄8年以上、胸径≥15cm的白木香树树干,通过钻孔的方式在树干形成直径0.6~1.5cm,深2~6cm的接种孔,纵向间隔6~10cm,打8个孔,绕圆周横向间隔5~8cm,打5~8个孔,每棵树南北两面孔分设为空白对照及阴性对照;3个月后,将纵向孔道以“Z型”斜向下钻孔打穿方式连接成一通道;然后接种,按纵列接种同种菌种原则,单一菌种与混合菌种分别进行,将菌种置固体培养基中培养15~25天后,连同培养基一起放入接种孔孔洞中,用聚酯纤维薄膜封闭洞口,于0、1、3、6、9、12、18、24个月后,取样观察与重复接种同时进行。
3.所述的取样方法为,于0、1、3、6、9、12、18、24个月后,纵向洞孔由下往上逐个撕去洞口外皮,观察洞口周围洞口染色面积,根据染色区域设定挖槽的长与宽,并各自向外扩延加长0.5cm,槽深为洞口到树干中心的距离挖取木块。
4.根据权利要求1所述的一种沉香结香菌种的筛选方法,其特征在于:所述的以结香区浸出物含量、洞口染色面积与菌种定殖率三项指标筛选促进白木香结香的优势菌种的方法为,首先记录结香情况,综合24个月所得数据,按中国药典对沉香的含量测定项方法计算结香区浸出物含量,并采用GC-MS法分析所得化合物的差异;然后计算洞口染色面积,综合24个月所得数据获得平均值;最后进行菌种的分离鉴定,每次取样挖取的木块,按结香区、染色区及白木区三部分对木块中菌种再次分离鉴定,计算定殖率,通过菌种定殖率的应用,判断菌种的侵染能力强弱,通过GC-MS分析不同菌种促进结香的化合物,判断菌种引导结香的品质,最终筛选出所需菌种或者菌种的混合比例。
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