[发明专利]一种增强人类细胞中非整合性基因表达的方法有效

申请号：	201410135902.6	申请日：	2014-04-04
公开（公告）号：	CN103923920A	公开（公告）日：	2014-07-16
发明（设计）人：	那洁;段福宇;李津旸	申请（专利权）人：	清华大学
主分类号：	C12N15/113	分类号：	C12N15/113;C12N15/67
代理公司：	北京纪凯知识产权代理有限公司 11245	代理人：	关畅;陈晓庆
地址：	100084 北京市海淀区北京***	国省代码：	北京;11
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摘要：
搜索关键词：	一种增强人类细胞中非整合基因表达方法
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【权利要求书】：

1.EBNA-D500DNA分子，该分子的序列如SEQ ID No.1所示。

2.EBNA-D500mRNA分子，该分子的序列如SEQ ID No.2所示。

3.一种提高外源基因在哺乳动物细胞中表达效率的试剂盒，包括权利要求1所述的EBNA-D500DNA分子或权利要求2所述的EBNA-D500mRNA分子和Episomal质粒；

所述试剂盒中包括使用说明书，使用说明书中记载如下内容：将外源基因插入Episomal质粒的多克隆位点，得到重组质粒；将重组质粒与权利要求2所述的EBNA-D500mRNA分子共同转染目的哺乳动物细胞；或，将外源基因插入Episomal质粒的多克隆位点，得到重组质粒；将权利要求1所述的EBNA-D500DNA分子进行体外转录，得到权利要求2所述的EBNA-D500mRNA分子，再将重组质粒与权利要求2所述的EBNA-D500mRNA分子共同转染目的哺乳动物细胞；

所述哺乳动物不包括鼠。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述提高外源基因在哺乳动物细胞中表达效率是指增加外源基因在哺乳动物细胞中的表达量和/或增长外源基因在哺乳动物细胞中的表达时间；

所述哺乳动物细胞为人类细胞；

所述人类细胞为如下中至少一种：人胚胎肾细胞、人类成纤维细胞、人类胚胎干细胞、人类诱导多能干细胞、人脐带血CD34⁺造血干细胞；

所述人胚胎肾细胞具体为人胚胎肾细胞293FT细胞；

所述人类胚胎干细胞具体为人类胚胎干细胞H9；

所述人类诱导多能干细胞具体为人类诱导多能干细胞MIFF。

5.一种增强哺乳动物细胞中外源基因表达的方法，包括如下步骤：将权利要求2所述的mRNA分子和带有外源基因的Episomal重组质粒共转染离体的哺乳动物细胞，得到重组细胞，与所述带有外源基因的Episomal重组质粒单独转染的所述离体哺乳动物细胞相比，重组细胞中外源基因的表达效率提高；

所述表达效率为所述外源基因的表达量和/或表达时间；

所述哺乳动物不包括鼠；

所述重组质粒是将所述外源基因插入所述Episomal质粒的多克隆位点得到；

所述方法为非疾病诊断或治疗方法。