[发明专利]菌酶协同发酵菜籽粕制备菜籽肽的方法

权利要求书

1.一种菌酶协同发酵菜籽粕制备菜籽肽的方法，其特征在于：利用具有产蛋白酶能力的细菌及霉菌与蛋白酶协同固态发酵菜籽粕制备菜籽肽，具体步骤为：

a.将通过压榨或浸出制油工艺得到的菜籽粕粉碎，得到菜籽粕粉；

b.将具有产蛋白酶能力的细菌与霉菌复配，制备发酵剂；

c.将步骤b制得的发酵剂与中性蛋白酶接入步骤a所得的菜籽粕粉，进行固态发酵；

d.对步骤c所得的固态发酵后基质进行灭酶；

e.加水浸提步骤d中固态发酵后的培养基，分离去除残渣，获得菜籽肽的粗提液；

f.将步骤e所得菜籽肽粗提液经过脱色、脱苦、脱盐、分离纯化和干燥获得菜籽肽粉。

2.如权利要求1所述的菌酶协同发酵菜籽粕制备菜籽肽的方法，其特征在于：步骤a中，所述菜籽粕的原料是普通油菜籽或双低油菜籽，粉碎后的菜籽粕粉的粒径为200~800μm，粉碎后的菜籽粕直接用于发酵或者经过105℃~121℃温度灭菌或湿热灭菌后用于发酵。

3.如权利要求1所述的菌酶协同发酵菜籽粕制备菜籽肽的方法，其特征在于：步骤b中，所述的具有产蛋白酶能力的细菌为枯草芽孢杆菌，霉菌为雅致放射毛霉菌。

4.如权利要求1所述的菌酶协同发酵菜籽粕制备菜籽肽的方法，其特征在于：步骤b中，制备发酵剂的步骤为：

b-1.配制无菌营养液，其组成为：葡萄糖与无菌营养液体积的质量体积比为0.5%～1%g/mL，KH₂PO₄与无菌营养液体积的质量体积比为0.3%～0.5%g/mL，pH为6.0~8.0；

b-2.将活化、扩大培养后的微生物菌种，用步骤b-1中配置的无菌营养液配制成菌种量为1×10⁶～1×10⁸个/mL的菌悬液，即为发酵剂。

5.如权利要求3所述的菌酶协同发酵菜籽粕制备菜籽肽的方法，其特征在于：步骤c中，发酵剂的加入总量为菜籽粕质量的1～1.5倍，枯草芽孢杆菌与雅致放射毛霉菌发酵剂体积比为1:1～4:1，中性蛋白酶添加量为50～250U/g，发酵剂与中性蛋白酶同步或分步接入菜籽粕粉中，发酵温度为25℃～45℃，发酵时间为1～5天，环境湿度40%～100%，发酵容器为固态发酵罐或发酵池。

6.如权利要求5所述的菌酶协同发酵菜籽粕制备菜籽肽的方法，其特征在于：步骤c中，中性蛋白酶经温度为40℃的温水活化1h后接入菜籽粕粉。

7.如权利要求1所述的菌酶协同发酵菜籽粕制备菜籽肽的方法，其特征在于：步骤d中，灭酶条件为：水浴，温度95℃～100℃，时间10~15min。

8.如权利要求1所述的菌酶协同发酵菜籽粕制备菜籽肽的方法，其特征在于：步骤e中所述的水为去离子水、蒸馏水或自来水，固态发酵后的培养基与水的固液比1:5～1:30g/mL，提取温度为15℃~80℃，提取时间为30~180min，提取1~3次。

9.如权利要求1或8所述的菌酶协同发酵菜籽粕制备菜籽肽的方法，其特征在于：步骤e中，分离去除残渣的方法为过滤或离心，其中，所述过滤采用真空过滤器或压力过滤器，所述离心的离心力为1000～14000g。

10.如权利要求1所述的菌酶协同发酵菜籽粕制备菜籽肽的方法，其特征在于：步骤f中，所述脱色、脱苦的步骤采用活性炭；所述脱盐的步骤采用离子交换色谱或反渗透；所述分离纯化的步骤为：通过截留分子量为30KDa、10KDa、5kDa，3kDa和1kDa的超滤膜超滤，获得五种不同生物活性的菜籽肽，或采用离子交换、凝胶层析、亲和层析方法，获得生物活性专一的菜籽肽；所述干燥的步骤为热风干燥、冷冻干燥或喷雾干燥。