[发明专利]一种检测人源N端-B型钠尿肽前体的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析领域，尤其是涉及一种检测人源N端-B型钠尿肽前体的试剂盒。

背景技术

心力衰竭(heart failure)是各种心脏结构或功能性疾病导致心室充盈和（或）射血能力受损而引起的一组综合症。由于心室收缩功能下降，射血功能受损，心排血量不能满足机体代谢的需要，器官、组织血液灌注不足，同时出现肺循环和（或）体循环淤血，临床表现主要是呼吸困难，无力而致体力活动受限和水肿。近期内心衰的发病率将继续增长，正在成为21世纪最重要的心血管病症。

B型钠尿肽（B－typenatriureticpeptide，BNP），又称脑钠素或脑钠肽，广泛分布于脑、脊髓、心肺等组织，其中以心脏含量最高。脑内以延髓含量最高，中枢神经系统的BNP含量高于ANP，脑与脊髓内BNP含量约较ANP含量高13倍。心脏内BNP主要存在于左、右心房，其中右心房含量为左心房3倍多，心室的BNP含量约不足心房的1/20。因钠尿肽具有排钠利尿、内皮非依赖性的血管平滑肌作用而具有降压、抗心肌纤维化、影响神经内分泌系统等功效。近来发现BNP在各种心血管疾病，尤其是心室功能不全、急性心肌梗死（AMI）、高血压等疾病的诊断、治疗及预后等方面具有重要意义，已引起临床工作者的高度重视。

心肌细胞首先合成108个氨基酸的BNP原，称之为proBNP（BNP前体）。在受到心肌细胞的刺激后（例如，心肌细胞拉伸），proBNP在蛋白酶作用下列解为NT-proBNP（氨基末端- proBNP或N端-proBNP）和生物活性激素BNP。两种多肽都释放进入血循环。两者来源相同并且等摩尔分泌。NT- proBNP生物稳定性好。其半衰期较长( 2 小时) ,浓度相对较稳定,有效检测时间长,血液中含量相对较高(比BNP高约16~ 20倍) ,检测相对容易,血浆标本在体外的稳定性长( > 48 小时),适合早期诊断。

NT- proBNP做为一种量化的心肌标志物,在早期心功能不全、 心衰诊断、 呼吸困难的心源性及非心源性心衰治疗及预后监测、 急性冠状动脉综合征的分级等方面,提供了快速、 准确的早期诊断依据。

目前用于检测NT-proBNP含量的方法主要由金标定性试验、荧光免疫法、联免疫吸附试验（ELISA）和磁微粒化学发光法（CMIA）。以上检测NT-proBNP的方法存在以下缺点：1）金标定性试验快速，但由于该方法的灵敏度低、无法动态观察NT-proBNP含量的变化；2）荧光免疫法操作复杂，对操作环境和操作人员有较高的要求；3）ELISA 法采用辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，缩略词为HRP)或碱性磷酸酶标记抗体，并催化底物产生颜色变化，具有操作简单，试剂稳定期长的特点，但ELISA 法的检测灵敏度较低，目前主要应用于传染性疾病筛查等对检测灵敏度要求较低的项目，并且反应时间比较长。从免疫诊断技术的发展看，CMIA 将是取代ELISA 方法的主流分析技术。CMIA是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化，形成一个激发态的中间体，当这种激发态中间体回到稳定的基态时，发射出光子，利用发光信号测量仪器测量光子数。CMIA法具有操作简单，检测速度快等优点，抽取病人全血后直接进行刺激过夜，分离出血浆就可以进行检测，灵敏度较高，试剂稳定期长，重复性较好，可以进行定量测定的优点，另外CMIA法采用了磁分离和全液相反应的技术，可以配合全自动化学发光分析仪进行使用，操作过程非常简单，不需要人工干预，自动进行，检测速度仅需15min。

通过国内专利检索， NT-proBNP的测试已有发明专利授权：其中罗赫诊断器材股份有限公司申请的发明专利《鉴定样品中的N-末端前BNP的方法，申请日2004年11月26日，授权公告号CN 1316248C》中就提供了一种使用至少两个抗体结合N-末端前氨基酸的10-50的氨基酸区域；另一个发明专利为霍夫曼-拉罗奇有限公司所有（确定NT-proBNP的分析夹心测试；申请日2000年1月27日，授权公告号为CN 1327228C），其使用的抗体组合为MAB 18.4.34(27-31)与PAB(39-50)或PAB(38-42) 或PAB(44-50)或MAB 17.3.1(13-16)与PAB(39-50)或PAB(38-42) 或PAB(44-50)或MAB 18.4.34(27-31) 与MAB(38-42)。上述两个专利中，NT-proBNP检测使用的抗体均包含了10-50（AA10-50）位氨基酸的NT-proBNP表位。

发明内容