[发明专利]用于检测等位基因CYP2C19*3的引物组合及检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体地说，涉及一种用于检测等位基因CYP2C19*3的引物组合及检测试剂盒。

背景技术

CYP2C19基因存在多种等位基因，包括*1、*2、*3……*17等。其中，具有正常酶活性的等位基因是CYP2C19*1，而CYP2C19*2和CYP2C19*3等位基因编码的酶无活性。由CYP2C19*2和CYP2C19*3导致的药物慢代谢占东方人慢代谢的99%，因此CYP2C19*2和CYP2C19*3的检测技术日益受到重视。患者如果为*1/*1则属于快代谢型；如果为*1/*2或*1/*3则属于中代谢型；如果为*2*2或*2/*3或*3/*3则属于慢代谢型。通过检测CYP2C19的G681A变异可以鉴定CYP2C19*2等位基因，通过检测CYP2C19的G636A变异可以鉴定CYP2C19*3等位基因。

CYP2C19基因型与个体化用药：

1）CYP2CI9基因型与氯吡格雷抵抗：氯吡格雷（波立维）是目前世界范围内使用最广泛的噻吩吡啶类抗血小板药，用于急性冠脉综合征、冠脉支架术和冠心病的一级、二级预防，可以减少心血管疾病患者心脏病发作、卒中以及死亡的风险。氯吡格雷是一种前体药物，在体外无活性，口服后必须在体内经肝脏细胞色素P450代谢为有效活性产物才能发挥其抗血小板聚集的作用。美国FDA发布警告称，药师可以通过检测CYP2C19的基因型来了解患者波立维的代谢能力，对于波立维慢代谢者可以增加药量或者选用其它抗凝血药物。

2）CYP2C19基因型与苯妥英血药浓度关系：苯妥英(phenytoin，PHT)是临床上常用的抗癫痫药物，具有亲脂性，进入人体后经I相反应进行生物转化后，由肾脏和肝脏排出体外。苯妥英代谢受CYP2C9和CYP2C19基因调控。研究结果显示，CYP2C19*2和CYP2C19*3与苯妥英的代谢缺陷关系密切，是苯妥英的关键代谢酶。检测CYP2C19基因型能够指导苯妥英服用剂量。

3）CYP2C19基因型与奥美拉唑临床疗效相关性：质子泵抑制药(PPIs)体内主要经CYP2C19代谢，其次是CYP3A4代谢。通过对CYP2C19基因型与奥美拉唑临床疗效的研究发现，奥美拉唑合用阿莫西林等抗生素治疗幽门螺旋杆菌感染性消化道溃疡患者，慢代谢和中间代谢患者愈合率明显高于快代谢患者。

4）CYP2C19基因型与伏立康唑：伏立康唑是一种广谱的三唑类抗真菌药，与目前国内市场上的抗真菌药相比，具有高效低毒的特点。伏立康唑通过细胞色素P450同工酶代谢，包括CYP2C19、CYP2C9和CYP3A4。这些酶的抑制剂或诱导剂可以分别增高或降低伏立康唑的血液浓度。伏立康唑进入人体后，快代谢患者与慢代谢患者血液浓度差异显著，慢代谢患者使用常规剂量可能出现毒副反应，此时应考虑减小剂量；快代谢和中间代谢患者应考虑给予常规剂量，根据疗效小幅增、减剂量；给予常规剂量，若快代谢患者出现毒副反应或慢代谢患者疗效不佳时，均应考虑换药。

目前已建立了多种G636A基因分型的方法，分述如下：

1、直接测序法：该方法是基因分型的金标准。但是该方法涉及基因特异扩增和测序反应两个步骤。不但成本高，耗时长，而且由于需要进行扩增后的处理，容易造成样本的污染。不适合在临床开展。

2、焦磷酸测序法：该方法同样是基因分型的金标准，与直接测序法具有相同的缺点。

3、高分辨率熔解曲线法：该方法涉及基因特异扩增和高分辨率熔解曲线分析两个步骤。其中高分辨率熔解曲线分析可以在不进行任何扩增后处理的前提下直接进行，因此方法简单，便宜，易于在临床推广。但由于普通的高分辨率熔解曲线方法不含有特异针对G636A位点的延伸引物或探针，其检测出的突变可能是针对扩增区段中任意位点。因此，特异性远逊于测序方法。

4、PCR-LDR法：该方法涉及基因特异扩增和连接酶检测反应两个步骤，成本高，耗时长，而且由于需要扩增后的特殊处理，容易造成样本的污染。

5、固相芯片法：该方法涉及基因特异扩增、杂交、检测等多个步骤，成本高，耗时长，而且扩增后的处理比较复杂，容易造成样本的污染。