[发明专利]干酪乳杆菌由来抑菌活性物质的分离方法

说明书

技术领域

本发明属于食品安全技术领域，具体涉及干酪乳杆菌由来抑菌活性物质的分离方法。

背景技术

生物防腐是通过益生菌生长代谢产生对病原菌和腐败菌生长繁殖有害的次级代谢产物，能够争夺生长环境空间和营养，限制有害微生物的生长繁殖，直至其死亡。生物防腐技术已经在一些发达工业国家得到迅速发展，并且成熟地应用于食品发酵行业。在食品行业，酸败是引起经济浪费和威胁公共卫生安全的重要原因。调查表明，世界上每年有超过20 %的食物因被腐败菌或致病菌污染而被废弃。

在食源性生物危害中，单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、高致病性大肠杆菌O157:H7、沙门氏菌以及产真菌毒素真菌等食源性致病菌一直是阻碍食品安全防控的绊脚石。1996年6-8月，在日本大阪地区发生一起因高致病性大肠杆菌0157:H7所引发的爆发流行，感染人数高达9000多人，其中死亡11人，引起世界各国健康卫生部门的极大关注。2000年，日本由金黄色葡萄球菌污染引发的雪印牛奶事件，中毒人数超过上万人，并导致该公司的破产倒闭。2011年下半年，美国爆发一起单核增生李斯特菌引起的食源性疾病暴发事件，从2011年7月31日出现首例报告病例至10月6日共报告病例109例，涉及美国24个州，这是l0多年来美国最严重的一起食源性疾病暴发事件。据世界卫生组织（WHO）统计表明，各国食源性疾病的漏报率高达90%以上，换言之，每年各国所公布的生物源性食物中毒事件只是冰山一角，实际发生数要比报告数高出300-500倍，即全世界每年生物源性食源中毒患者高达数亿人。

乳酸菌是革兰氏阳性、无孢子、不能运动、形态呈杆状或球状，能够发酵碳水化合物产生酸类物质的一类细菌统称，通过其产生的次级代谢产物，诸如有机酸、细菌素、过氧化氢等物质抑制病原菌和腐败菌的生长繁殖，从而达到生物防腐作用。乳酸、甲酸、醋酸、丙酸等是乳酸菌分泌产生有机酸的主要组成，这些有机酸可以通过降低环境体系的pH达到遏制病原菌的生长繁殖目的，由此发挥生物防腐作用（De Vuyst L, Leroy F. Bacteriocins from lactic acid bacteria: production, purification, and food applications. Journal of molecular microbiology and biotechnology. 2007;13(4):194-9.；Sobrino-López A, Martín-Belloso O. Use of nisin and other bacteriocins for preservation of dairy products. International Dairy Journal. 2008;18(4):329-43）。对病原菌的抑菌效能是衡量益生菌的一个重要性能指标。乳酸菌作为益生菌定植于人体胃肠道和泌尿系统，能够维持胃肠道和泌尿系统的正常菌群平衡，有效阻止生物体内致病菌和腐败菌引起的感染性疾病。在食品行业中，源于其分泌的次级代谢产物具有提高食品口感、增加营养、延长保质期等优点，所以乳酸菌在食品生物防腐上发挥重要作用。作为益生菌，它还能有效降低血清胆固醇、减少癌症发病率、增强胃肠道黏膜的抵御能力，并且能够辅助提高机体的免疫功能和消化系统的消化功能。伴随食品安全问题的日益激化，乳酸菌的研究和应用越来越受到广大科研工作者和食品制造行业的关注，希望通过生物工程技术，将其早日应用于生物防腐领域，不但能解决因食源性病原菌污染食品导致疾病暴发及造成巨大的经济损失，同时也能提高食品的营养价值。

乳酸菌代谢产生诸如有机酸、大分子蛋白及小分子肽类细菌素、H₂O₂等广谱抑菌活性物质，然而有机酸和细菌素呈现显著的抑菌作用。至今，主要应用硫酸铵沉淀法分离干酪乳杆菌由来的抑菌物质，虽然该方法简单易行，但是只能分离蛋白类干酪乳杆菌素，而其他抑菌物质无法分离获得，并且其分离效率低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种干酪乳杆菌由来抑菌活性物质的分离方法，该方法利用乙酸乙酯萃取干酪乳杆菌上清培养液，通过旋转蒸发仪浓缩萃取的各抑菌相。

具体步骤如下：