[发明专利]一种山羊生长性状的MSTN基因分子标记选择方法

说明书

技术领域

本发明涉及山羊肌肉生长抑制素基因(Myostatin,MSTN)5’UTR区域一个多态性位点的检测方法和应用范围，属于分子生物学领域。

背景技术

生长是肉用山羊主要的经济性状，同时也是数量性状，表型选择遗传进展缓慢，开发辅助选择的分子标记可以加快遗传进展。肌肉生长抑制素基因(Myostatin,MSTN)又称生长分化因子8(Growth Differenti-ation Factor8,GDF-8)，属于转化生长因子β(Transforming Growth Factor beta,TGF-β)超家族成员。Mc Pherron等（1997）首先在小鼠中发现MSTN是影响动物肌肉骨骼肌重量的重要基因。MSTN基因的正常功能是调节动物骨骼肌的总量，使之保持适当的比例，在肌肉的生长发育中起着重要的调节作用，该基因突变可引起多种动物双肌性状的产生。

在肉牛中，MSTN的3个外显子上有9个影响氨基酸序列的变异，其中6个可导致双肌,表现出肌肉发达、初生重增加和生长速度快的优势。如比利时蓝牛和皮埃蒙特牛的双肌性状就是该基因突变造成的。关学敏等报道猪MSTN基因发生在5’调控区的突变可能与猪的生长性状有关。Johnson等在特克塞尔绵羊MSTN基因区域发现存在一个影响肌肉和脂肪性状的QTL。Clop A等进一步研究发现特克塞尔绵羊MSTN基因3'UTR区G/A突变可能产生了一个microRNA靶点，使得MSTN基因翻译受到抑制，造成肌肉肥大。Marcq等分析了比利时特克塞尔双肌绵羊的可能遗传机制，与普通绵羊相比，双肌羊的MSTN基因的编码区虽然没有碱基的差异，但采用该基因侧翼序列的微卫星标记进行连锁分析表明，在绵羊染色体2q远端区存在一个对肌肉发育产生效应的QTL，该基因座可能就是MSTN基因，推测影响该基因表达的区域很可能在C端或N端的非翻译区域或内含子部分。Li等分析了24个山羊品种，8个绵羊品种MSTN基因部分内含子2序列的遗传变异，结果在山羊测序区域发现7个多态性位点。以上研究表明，MSTN基因对家畜的生长性状起重要的调节作用。但有关山羊MSTN基因5’UTR区突变与生长性状的关联研究未见报道，而该区域很可能对山羊MSTN基因表达起到调控作用，从而影响山羊的生长。

波尔山羊是世界著名的肉用山羊品种，生长速度快，产肉率高。自引进以来，对我国肉用山羊产业的发展起了十分重要的作用，但引进的波尔山羊质量参差不齐以及多年缺乏选育后的种质严重退化，给肉用山羊产业带来了危机，以波尔山羊与本地山羊杂交选育适合当地饲养环境的肉用山羊新品种（系）和通过本品种选育恢复波尔山羊的优良生产性能具有现实的紧迫性。如何提高选则的准确性、加快育种进程是目前面临的主要问题。

发明人在《8个绵山羊群体中肌肉生长抑制素基因DraⅠ酶切多态性分析》中采用限制性内切酶DraⅠ对8个绵羊、山羊群体（湖羊、小尾寒羊、陶赛特、特克塞尔、杜泊羊、波尔山羊、长江三角洲白山羊、黄淮山羊）中MSTN基因5’UTR区进行PCR-RFLP分析，筛选多态性位点。结果表明，在所有受检绵羊群体中只检测到BB1种基因型；而在山羊群体中均检测到3种基因型，其中波尔山羊、长江三角洲白山羊以AA居多，AB型次之，BB型很少；黄淮山羊则以AB型居多，BB型次之，AA型较少。但是，该文并没有公开上述基因型与生长性状的关系。

发明内容

本发明的目的在于克服山羊育种中生长性状表型选择准确性低，遗传进展慢的缺陷，提供一种山羊生长性状的MSTN基因分子标记选择方法，提高波尔山羊生长性状选择的准确性，加快以波尔山羊为育种素材的山羊新品种培育进程。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

1）提取山羊基因组DNA；

2）利用两条特异性引物扩增MSTN5’UTR区（序列DQ167575，23-615bp区域），得到593bp扩增产物；所述的两条特异性引物序列为P1：CAATCACAGATCCCGACG（SE Q ID NO.1），P2：TGCACTAGCAGAACTACTCACC（SEQ ID NO.2）；

3）利用DraⅠ限制性内切酶对所述的扩增产物进行酶切分型，仅获得593bp片段的定义为AA型，获得593bp、424bp、174bp三个片段的定义为AB型，获得424bp、174bp两个片段的定义为BB型；

4）AB型和BB型的生长性状明显优于AA型，选择AB型和BB型个体留种。

有益效果