[发明专利]硫磺矿硫化叶菌中（+）γ-内酰胺酶的编码基因及应用

权利要求书

1.硫磺矿硫化叶菌中（+）γ-内酰胺酶，表达的蛋白质如下：

（a）由序列表中的SEQ ID NO:1的氨基酸残基序列组成的蛋白质。

2.一种包含权利要求1所述的（+）γ-内酰胺酶的编码基因，其特征在于：这种（+）γ-内酰胺酶的编码基因具有下列核苷酸序列之一：

（a）序列表中SEQ ID No:2所示的核苷酸序列；

（b）编码序列表中SEQ ID No:1的氨基酸残基序列对应的多核苷酸序列。

3.一种重组载体，其特征在于：其含有权利要求2所示的编码基因包括的核苷酸序列，原核表达载体为pET30或者pET28。

4.一种表达宿主，其特征在于：含有权利要求3所示的重组载体，一般表达宿主为大肠杆菌。

5.根据权利要求1所述的硫磺矿硫化叶菌中（+）γ-内酰胺酶的应用，为在拆分消旋体γ-内酰胺从而得到（-）γ-内酰胺的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述应用为：将消旋体γ-内酰胺底物加入0.5M，pH7.4的磷酸缓冲液中，使消旋体γ-内酰胺底物浓度在0.005M-0.1M之间；然后向其中加入（+）γ-内酰胺酶，在90℃转化5-24h，制得（-）γ-内酰胺。

7.根据权利要求5或6所述的应用，纯化（+）γ-内酰胺酶蛋白采用热处理去除杂蛋白从而得到纯的（+）γ-内酰胺酶的。

8.根据权利要求7所述的应用，纯化的（+）γ-内酰胺酶在拆分γ-内酰胺的时加入Ni²⁺或Zn²⁺。