[发明专利]鉴定骨髓中是否存在保护白血病干细胞微环境的试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及白血病诊断和治疗试剂盒领域，更具体地讲，涉及鉴定骨髓中是否存在保护白血病干细胞微环境的试剂盒及其应用。 

背景技术

目前，白血病的治疗方法和药物，主要是针对白血病（干）细胞（leukemia propagating cells,LPCs）自身进行设计和使用，虽然能缓解疾病，但是不能清除病人体内所有的白血病细胞，因此导致复发；更准确地说，现有的治疗方法或药物，不能清除骨髓中残留的LPCs。这是由于治疗过程中，骨髓中会形成特殊的微环境（niche）对残留LPCs进行保护，使得现有的治疗方法和药物，不能清除这些细胞，导致复发。 

目前已有报道白血病细胞浸润骨髓会改造或破坏骨髓微环境，但是，因为缺乏适当的方法或技术，还没有鉴定到任何白血病干细胞特定的保护niche，也没有针对该niche的治疗药物。 

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是，提供一种鉴定骨髓中是否存在保护白血病干细胞微环境的试剂盒。 

本发明所要解决的第二个技术问题是，通过阻断保护白血病干细胞微环境形成和干扰其保护LPCs，找到可干预该微环境形成和解除对LPCs保护的靶点，提供针对这些靶点的抑制剂和/或中和抗体在制备提高白血病化疗效果药物中的应用。 

为了解决上述第一个技术问题，本发明提供了鉴定骨髓中是否存在保护白血病干细胞微环境的试剂盒，其特征在于，所述保护白血病干细胞微环境为NSM微环境，所述NSM微环境早期为Nestin⁺基质干细胞，随后转变成α-SMA⁺基质细胞，所述Nestin⁺基质干细胞表达CCR1、Vimentin、LepR、CD51和CD29，所述α-SMA⁺基质细胞表达Vimentin，所述试剂盒包括下述抗Nestin、抗α-SMA、抗CCR1、抗Vimentin、抗LepR、抗CD51和抗CD29的抗体中的一个或多个。 

为了解决上述第二个技术问题，本发明提供了CCL3抑制剂、抗CCL3中和抗体、CCL3受体CCR1抑制剂或者抗CCR1中和抗体在制备提高白血病化疗效果药物中的应用。 

作为一个优选方案，所述受体抑制剂为BX471。 

为了解决上述第二个技术问题，本发明提供了GDF15抑制剂或抗GDF15中和抗体在制备提高白血病化疗效果药物中的应用。 

作为一个优选方案，所述GDF15抑制剂为干扰RNA iGDF15。 

为了解决上述第二个技术问题，本发明提供了蛋白酶Furin抑制剂或抗Furin中和抗体在制备提高白血病化疗效果药物中的应用。 

作为一个优选方案，所述Furin抑制剂为CMK。 

本发明的优点在于，本发明首次发现保护LPCs微环境，命名为NSM-niche，并开发出鉴定白血病患者骨髓中NSM-niche是否存在的试剂盒。通过鉴定患者骨髓中是否存在NSM-niche，能准确判断疾病进展和预后。根据LPCs的保护机制，找到可干预该微环境形成和解除对LPCs保护的靶点，这些靶点的抑制剂和/或中和抗体可用于制备提高白血病化疗效果的药物，有利于清除病人体内残留的LPCs，最终治愈白血病。 

附图说明

图1总体技术方案图。 

图2白血病细胞在骨髓中的浸润和保护微环境的形成。A,实时成像观察，GFP标记的白血病细胞在骨髓中的动态浸润和破坏。B,实时成像观察用Ara-C化疗2-4天后，白血病细胞残留在骨髓中。C,HE染色显示保护微环境（niche）形成，围绕并庇护残留白血病细胞。 

图3鉴定骨髓中形成保护niche的组成细胞。A-D,Ara-C化疗2天（A2D）时niche组成细胞的表型分析。E-F,Ara-C化疗4天(A4D)时niche组成细胞的表型分析。G,化疗2天时niche组成细胞的功能成球实验。H,A2D时niche组成细胞的诱导分化实验。注：早期A2D时niche组成细胞为Nestin⁺基质干细胞，稍晚A4D时转为α-SMA⁺，因此称该niche为NSM-niche。