[发明专利]一种从绒山羊次级毛囊组织中提取总RNA的方法

权利要求书

1.一种从绒山羊次级毛囊组织中提取总RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）采集、保存和运输毛囊组织：采集羊毛和羊绒混合物，经RNAlater保存液处理并低温保存使样品满足长途运输的需要；

2）分离次级毛囊组织：在RNAlater保存液中从羊毛和羊绒混合物中分离出羊绒，在距离羊绒根部毛囊泡1cm处剪断，收集所有带有完整毛囊泡的羊绒根部，即分离得到次级毛囊组织；

3）提取次级毛囊组织总RNA；

4）检测总RNA样品质量。

2.根据权利要求1所述的一种从绒山羊次级毛囊组织中提取总RNA的方法，其特征在于，所述步骤3）具体包括以下步骤：

1）将分离的次级毛囊组织迅速转移到裂解液中，用研磨杵研磨裂解液中的次级毛囊组织，充分研磨以破碎组织得到混合液，研磨时间为5-10min，小心用尖头镊子剔除绒干；

2）用移液器将研磨过的混合液转移到指形管中，10000rpm离心3-5min，小心将上清液转移到指形管中；

3）向上清液中加入等体积的70%乙醇溶液并混匀，混匀后的溶液转移到硅胶膜吸附柱中，放入指形管后盖上管盖，10000rpm离心2-3min，弃去废液后再将吸附柱放入到一新的指形管中；

4）向步骤3）处理后得到的吸附柱中加入500μL去除蛋白质溶液，10000rpm离心2-3min，弃去废液后再将吸附柱放入到一新的指形管中；

5）向步骤4）处理后得到的吸附柱中加入1U/μL DNase I100μl，室温静置15-20min；

6）向步骤5）处理后得到的吸附柱中加入500μL漂洗液，室温静置3-5min后10000rpm离心2-3min，弃去废液后再将吸附柱放入到一新的指形管中；重复漂洗操作两次；

7）将步骤6）处理后得到的吸附柱在室温条件下静置5-10min，充分挥发掉吸附柱中硅胶膜上的漂洗液；

8）将步骤7）处理后得到的吸附柱放入到一新的指形管中，在吸附柱中的硅胶膜上加入20μl RNase-free的超纯水，盖上管盖后室温静置5-10min；10000rpm离心2-3min，指形管中收集的即为总RNA溶液样品。

3.根据权利要求2所述的一种从绒山羊次级毛囊组织中提取总RNA的方法，其特征在于，所述指形管为1.5mL的RNase-free指形管。

4.根据权利要求2所述的一种从绒山羊次级毛囊组织中提取总RNA的方法，其特征在于，所述裂解液为pH值7.0，浓度为30mmol/L的Tris-HCl、5mol/L异硫氰酸胍，1%β-巯基乙醇配制而成。

5.根据权利要求2所述的一种从绒山羊次级毛囊组织中提取总RNA的方法，其特征在于，所述去除蛋白质溶液为pH值为7.0，浓度为15mmol/L的Tris-HCl，0.2mol/L异硫氰酸胍，10%无水乙醇配制而成。

6.根据权利要求2所述的一种从绒山羊次级毛囊组织中提取总RNA的方法，其特征在于，所述漂洗液为pH值为7.0，浓度为15mmol/L的Tris-HCl，80mmol/LNaCl，70%无水乙醇配制而成。