[发明专利]一种人胆管癌耐药细胞株及其应用

权利要求书

1.一种人胆管癌耐药细胞株，其特征在于：保藏编号为CCTCC No：C201441。

2.一种如权利要求1所述的人胆管癌耐药细胞株的培养方法，具体步骤如下：

A. 将人胆管癌细胞加入细胞培养液进行培养，用胰蛋白酶消化传代；

B. 当细胞培养至细胞密度达到70%～90%时，更换新鲜的细胞培养液，并在细胞培养液中加入5-FU，使得5-FU在细胞培养液中的作用浓度为25μg/ml，继续培养，而后弃去5-FU的细胞培养液，并用PBS液清洗；

C. 将清洗后的细胞依次按照步骤A和步骤B的方法，重复培养3～5次，得到在5-FU作用浓度为25μg/ml时，能稳定生长、传代、复苏的活细胞；

D. 将步骤B中5-FU作用浓度增至50μg/ml，再将步骤C得到的细胞依次按照步骤A和步骤B的方法，重复3～5次，得到在5-FU作用浓度为50μg/ml时，能稳定生长、传代、复苏的活细胞；

E. 将步骤B中5-FU作用浓度增至75μg/ml，再将步骤D得到的细胞依次按照步骤A和步骤B的方法，重复3～5次，得到在5-FU作用浓度为75μg/ml时，能稳定生长、传代、复苏的活细胞；

F. 将步骤B中5-FU作用浓度增至100μg/ml，再将步骤E得到的细胞依次按照步骤A和步骤B的方法，重复3～5次，得到在5-FU作用浓度为100μg/ml时，能稳定生长、传代、复苏的活细胞；

G. 将步骤F得到的细胞撤去5-FU培养1个月，适时换液，再在5-FU作用浓度为50μg/ml的细胞培养液中维持培养。

3.如权利要求1所述的人胆管癌耐药细胞株在构建体外肿瘤耐药模型中的应用。

4.如权利要求1所述的人胆管癌耐药细胞株在筛选抗肿瘤药物中的应用。