[发明专利]成团泛菌新菌株XM2及其菌悬液的制备方法和对梨黑斑病的防治方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体地说是涉及一种成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2及其对梨黑斑病的防治方法。

背景技术

梨黑斑病是一种危害严重的世界性气传真菌病害，由链格孢（Alternaria alternata）引起，在梨果采前和采后均有发生。我国是梨种植和出口大国，采后病原微生物的侵染造成采后腐烂损失严重，直接影响梨果贮运生产，梨黑斑病的有效防治成为梨产业中急待解决的问题。使用化学杀菌剂控制水果的采后病害一直被认为是最有效的控制方法。然而，随着病原菌抗药性的逐渐增加，及人们对水果质量要求的提高和环保意识的加强，果蔬采后生物防治方法作为一种控制采后病害的新途径，逐渐为人们所认可，并成为研究热点。近年有不少关于梨黑斑病生物防治的研究报道。齐东梅等筛选了一株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）H110，其发酵液对梨采后黑斑病的防治率达到86.6%。谢莉从土壤中分离到金色链霉菌（Streptomyces aureus）B-105，其发酵液对梨黑斑病的抑制率67.4%。Benbow等研究了隐球酵母属的Cryptococcus informominiatus和红酵母属的Rhodotorula glutinis对梨病害的抑菌效果，Cryptococcus informominiatus和 Rhodotorula glutinis在采收前1 d对梨进行处理，能有效地控制梨的采后黑斑病。宋聪等分离到一株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）J18，梨果在菌悬液中浸果30 s，晾干后喷施接种链格孢菌，梨黑斑病的发病率仅为16.57%，且菌株能在梨果上很好地定殖。

发明内容

本发明的目的是提供一株成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2及其对梨黑斑病的防治方法。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的。

一株成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2，于2014年2月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.8822 ，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

所述的成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2是从山西省太原市金滩村西梅果实表面分离并纯化得到。在溶菌肉汤（LB）培养基培养48 h~72 h。成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2呈革兰氏阴性菌，短杆状，大小为( 0.5 ~ 0.9) μm×( 1.0 ~ 2.5) μm，有鞭毛，具有运动性（见图1）。在LB培养基平板上好氧培养24 h ~ 48 h后，产生表面光滑、凸起、半透明、边缘整齐、直径为2.0 mm ~ 3.0 mm的黄色菌落。菌株XM2为兼性厌氧菌，生长pH范围为5.7 ~ 7.5，生长温度范围为4℃ ~ 40℃，NaCl浓度范围 0% ~ 7%。其它生理生化指标如表1所示：

表1 菌株XM2生理生化特征

经16S rDNA序列测定：PCR扩增得到菌株XM2的16S rDNA片段，测序长度为1386 bp，在GenBank中的序列登录号为KF150143。将16S rDNA序列与GenBank数据库中的序列进行BLAST比对，结果表明，菌株XM2与泛菌属Pantoea中的成团泛菌（P. agglomerans）的同源性达到99.8% ，结合形态特征和生理生化指标，确定菌株XM2为成团泛菌（P. agglomerans）。

所述的溶菌肉汤（LB）培养基由以下质量/体积份的原料组成：酵母粉5，蛋白胨10 ，NaCl 5 ，琼脂粉18 ，蒸馏水1000；pH 7.4-7.6。成团泛菌新菌株XM2菌悬液的制备方法，包括如下步骤：

(1) 种子液制备 从试管斜面上用接种针挑取一环新鲜成团泛菌XM2单菌落，接种于LB培养液中，28℃、160 rpm/min震荡恒温培养24 h，制得成团泛菌XM2的种子液；

(2) 发酵液制备 将成团泛菌XM2的种子液按照1%的比例接入LB培养液中，28℃ 160 rpm/min震荡恒温培养72 h，制得成团泛菌XM2的发酵液；