[发明专利]以幼花为外植体的虎眼万年青离体快繁方法

权利要求书

1.以幼花为外植体的虎眼万年青离体快繁方法，其特征在于包括下列步骤：

1)外植体接种及愈伤组织诱导：将幼花序花苞从子房下端剪开取下，将完整的花苞放入无菌超净台中，用75％(体积/体积)酒精浸泡60～90秒，用0.1～0.2％(质量/体积)的升汞溶液浸泡8～10分钟，无菌水冲洗3～5遍。将花苞从子房上部切开，然后将花苞上部大部分切掉，剩余部分纵切一刀或两刀，接种在含6-BA1.5～2.0mg/L、NAA0.1～0.2mg/L、蔗糖3.0～4.5％(质量/体积)，pH值为5.5～6.5的MS培养基上，20℃～30℃每天日光灯照射4～6小时，光照强度1500～2000Lux。25～35天继代一次，待长出黄绿色愈伤时即便可诱导分化；

2)不定芽的诱导：将黄绿色的愈伤转接到诱导分化培养基：MS+6-BA(1～1.5mg/L)+2，4-D(1～2mg/L)+3.5～4.5％蔗糖(质量/体积)，pH值为5.5～6.5，40～50天继代一次，20℃～30℃每天日光灯光照8～10小时，光照强度1500～2000Lux。该愈伤分化能力可持续一年以上，从一块愈伤经反复继代可分化出500株左右的再生苗；

3)根的诱导：再生植物转到1/2MS+NAA(0.5～2mg/L)+蔗糖2％(质量/体积)，pH值为5.5～6.5的生根培养基上，20℃～30℃每天日光灯光照12～14小时，光照强度1500～2000Lux；

4)再生植株移栽：植株生根后即可移栽，移栽至草炭：蛭石：细沙＝3∶1∶1的种植基质中，移栽前将植株上的琼脂等杂物冲洗干净，种植基质121℃灭菌30～45分钟，10～15天浇一次透水便可成活。