[发明专利]一种用于检测鸡青胫性状连锁SNP位点基因型的引物、试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明具体涉及一种用于检测鸡青胫性状连锁SNP位点基因型的引物，以及包含该引物的试剂盒，同时还涉及检测鸡青胫性状连锁SNP位点基因型的方法，属于生物检测技术领域。

背景技术

随着城市卫生的规范管理和环境控制要求的严格，大中城市农贸市场活禽销售量将逐渐减少，白条鸡和分割鸡形式上市的肉鸡产品份额将不断增加。对于冷鲜鸡市场来说，优质鸡区别于快大肉鸡的显著标识显得异常重要。我国的地方鸡常具有青胫的特征，因此人们常常以白条鸡胫色来进行判定，所以青胫鸡在品种的培育中具有重要意义。

对于鸡青胫基因位点，青胫鸡分为纯合型和杂合型两种类型。我们在青胫鸡的育种中需要选育出纯合青胫基因型，来满足的育种需求。因此利用分子生物手段来诊断某个体在青胫位点的基因型，这对我们育种来说是非常重要和必要的。

近年来，人们发展了多种用于探寻分子遗传标记的方法，最常见的有限制性内切酶片段长度多态性分析（PCR-RFLP）、单链构象多态技术（SSCP）和直接测序技术等，但SSCP操作繁琐、耗时长，结果易造成误判；而直接测序技术的成本较高。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测鸡青胫性状连锁SNP位点基因型的引物。

同时，本发明还提供一种用于检测鸡青胫性状连锁SNP位点基因型的试剂盒。

最后，本发明还提供一种检测鸡青胫性状连锁SNP位点基因型的方法。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：

一种用于检测鸡青胫性状连锁SNP位点基因型的引物，包括引物对P：

上游引物P-F：5’-AATCCAACCAACCAACCAA-3’（如SEQ ID NO.1所示），

下游引物P-R：5’-TTGCTGTTACACCATCATCT-3’（如SEQ ID NO.2所示）。

一种用于检测鸡青胫性状连锁SNP位点基因型的试剂盒，主要包括引物对P：

上游引物P-F：5’-AATCCAACCAACCAACCAA-3’，

下游引物P-R：5’-TTGCTGTTACACCATCATCT-3’。

具体的，用于检测鸡青胫性状连锁SNP位点基因型的试剂盒，还可以包括2×Taq PCRMaster Mix（含Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺及缓冲液）、内切酶BamHI、1×NEBuffer3.1（含NaCl、Mg²⁺、BSA及缓冲液）、超纯水及DNA Marker等。

更具体的，用于检测鸡青胫性状连锁SNP位点基因型的试剂盒，包括：引物对P20μL、2×Taq PCR Master Mix（含22mM Tris-HCl(pH8.4)，55mM KCl，1.65mM MgCl₂，220μMdGTP，220μM dATP，220μM dTTP，220μM dCTP，22U重组Taq DNA聚合酶/ml）1mL、10U/μL内切酶BamHI50μL、1×NEBuffer3.1（100mM NaCl，50mM Tris-HCl，10mM MgCl₂，100μg/ml BSA）200μL、灭菌超纯水500μL及DNA Marker（600bp、500bp、400bp、300bp、200bp和100bp）30μL。

一种检测鸡青胫性状连锁SNP位点基因型的方法，包括以下步骤：

（1）以待检测鸡全基因组DNA为模板，采用引物对P进行PCR扩增，得到扩增片段；

（2）取扩增片段进行BamHI酶切，酶切产物电泳后根据电泳结果判定鸡青胫基因型；

所述步骤（1）中引物对P为：

上游引物P-F：5’-AATCCAACCAACCAACCAA-3’，

下游引物P-R：5’-TTGCTGTTACACCATCATCT-3’。

所述步骤（1）中待检测鸡全基因组DNA可采用苯酚-氯仿粗提法或蛋白酶K法提取。

所述步骤（1）中PCR扩增的反应体系为：2×Taq PCR Master Mix6.25μL，ddH₂O4.25μL，P-F0.5μL，P-R0.5μL，DNA模板1.0μL。