[发明专利]一种肉桂地链霉菌发酵生产莫能菌素的新型培养基和培养方法

说明书

技术领域

本发明属于发酵技术领域，特别是涉及一种肉桂地链霉菌发酵生产莫能菌素的新型培养基和培养方法。

背景技术

莫能菌素又名莫能霉素、莫能菌酸、瘤胃素,由美国Eli lilly公司于1967年从一株肉桂地链霉菌中分离到的一种脂溶性抗生素。它是一种广谱抗球虫药,对金黄色葡萄球菌,链球菌,枯草杆菌等革兰氏阳性菌和猪血痢密螺旋体等都具有较高的抗菌活性。主要用于防治鸡，兔，犊牛，羔羊的球虫病和猪痢疾，并能促进其生长发育和提高饲料利用率。

目前，国内莫能菌素的发酵生产采用三级发酵模式，该方式存在的主要问题有以下几点：

1 莫能菌素发酵水平较低，一般控制在35000u/ml左右。

2 国内发酵生产莫能菌素的培养基中加入葡萄糖，经高温灭菌，易导致部分葡萄糖碳化，降低总糖含量，影响发酵液质量。

3 莫能菌素发酵生产所需的原材料采购成本较高。莫能菌素培养基中常用的有机氮源主要是花生饼粉（或黄豆饼粉）、蛋白胨、酵母粉，其市场价格较高。

4 国内莫能菌素的发酵培养周期较长，一般在300h以上，导致能耗较高。

发明内容

本发明的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种发酵工艺简单，有效提高发酵单位，同时最大限度的降低原辅料对发酵单位的影响，降低生产成本，且原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现莫能菌素稳定、高效生产的新型培养基。

本发明的另一目的是提供利用上述培养基生产莫能菌素的培养方法。

为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种肉桂地链霉菌发酵生产莫能菌素的新型培养基，包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其特征在于所述一级种子培养基的组成为：麸皮1～5g/L、麦芽糖5～9g/L、鱼粉3～7g/L、玉米浆5～9ml/L、玉米蛋白粉1～5g/L、啤酒酵母浸膏4～8g/L，硫酸铵1～5g/L、轻质碳酸钙1～5g/L、橄榄油或菜籽油5～9ml/L；

所述二级种子培养基组成为：麸皮3～7g/L、麦芽糖6～10g/L、鱼粉6～9g/L、玉米浆8～12ml/L、玉米蛋白粉3～7g/L、啤酒酵母浸膏5～9g/L，硫酸铵3～7g/L、轻质碳酸钙1～5g/L、磷酸二氢钾0.5～0.9g/L，橄榄油或菜籽油15～25ml/L；

所述发酵培养基组成为：麸皮8～12g/L、麦芽糖10～14g/L、鱼粉7～11g/L、玉米浆15～19ml/L、玉米蛋白粉5～9g/L、啤酒酵母浸膏15～19g/L，硫酸铵4～8g/L、轻质碳酸钙3～7g/L、磷酸二氢钾0.5～0.9g/L，橄榄油或菜籽油25～40ml/L。氯化钠0.3～0.7g/L、硫酸镁0.2～0.6g/L、硫酸亚铁0.1～0.5g/L、聚氧丙烯甘油0.3～0.4g/L。

一种利用上述培养基生产莫能菌素的培养方法，其特征在于其工艺步骤为：

1）一级种子培养：首先将一级种子培养基灭菌并冷却至25～30℃，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的肉桂地链霉菌母瓶发酵液按照0.3～0.5L/m³的接种量接入该一级种子培养基中进行一级种子培养，至菌体浓度20～25%、pH值6.5～8.5、培养时间25～35h时移种；

2）二级种子培养：先将二级种子培养基灭菌，冷却至25～30℃，并用无菌空气保压，将培养好的一级种子液移入二级种子培养基中进行二级种子培养，移种比例控制在9～11%，至菌体浓度30～35%、pH值6.5～8.5、培养时间30～35h时移种；

3）发酵培养：先将发酵培养基灭菌，冷却至20～27℃，并用无菌空气保压，然后将培养好的二级种子液移入发酵培养基进行发酵培养，移种比例控制在9～11%，至菌体浓度35～40%、还原糖＜1.5g/L、脂肪：＜2g/L 、氨基氮：10～30mg/100ml、化学效价＞43000u/mL、pH：6.0～7.0、培养时间260～280h时终止发酵。

灭菌后的一级种子培养基的质量要求：氨基氮：50～60mg/100ml、溶磷：100～150ug/ml、脂肪：10～25g/L、pH：6.5～7.5；

灭菌后的二级种子培养基的质量要求：氨基氮：60～70mg/100ml、溶磷：100～150ug/ml、脂肪：15～30g/L、pH：6.5～7.5；

灭菌后的发酵培养基的质量要求：氨基氮：70～80mg/100ml、溶磷：150～200ug/ml、脂肪：25～40g/L、pH：6～7。