[发明专利]一种从中药石刁柏中分离提取石刁柏皂苷的方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药有效成分的提取方法，具体是一种从中药石刁柏中分离提取石刁柏皂苷的方法。

技术背景

石刁柏，又名芦笋，为百合科天门冬属多年生草本植物石刁柏（Asparagus officinalis L.）的嫩茎，具有益气养阴、润肺、活血的功效。现代药理实验表明石刁柏提取物对多种癌细胞有抑制作用，表现出较强的抗肿瘤作用，其中的甾体皂苷为重要的活性成分。目前尚无石刁柏皂苷对照品及其制备方法，用于控制石刁柏药材、提取物及制剂的质量标准。已有文献以薯蓣皂苷元或菝契皂苷元为指标，将石刁柏样品中皂苷类成分水解转化为皂苷元进行总皂苷元测定，备样方法繁琐，且结果难以反映样品中原生苷的含量。

石刁柏皂苷是从石刁柏中提取纯化得到的，可作为对照品控制石刁柏药材、提取物及制剂的质量标准。石刁柏皂苷，名称(25S)-spirostan-5-ene-3β-ol-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1,2)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1,4)]-β-D-glucopyranoside，分子式C₄₅H₇₂O₁₆，其结构式如下：

已有文献（Fitoterpia,2010,210-213）采用乙醇提取，乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，将正丁醇部位过D101型大孔树脂得粗皂苷。粗皂苷经MCI树脂分离后，再进行硅胶色谱柱分离，最后进一步通过HPLC纯化得到皂苷纯品。该方法步骤繁琐，成本高，得率低（0.000014%）。针对该问题，我们开发了一种操作简单、成本较低、得率较高、对环境污染较小，纯度在98%以上石刁柏皂苷的制备方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从石刁柏中分离提取石刁柏皂苷的方法，该方法操作步骤简单，成本较低，石刁柏皂苷纯度在98%以上，可以作为化学对照品。

本发明的技术方案如下：

（1）提取：取干燥石刁柏粉末，加入液固比为5～15ml/g的60%～95%乙醇溶液回流提取三次，每次提取2～5h，提取温度50℃～90℃，将三次所得提取液合并，过滤，滤液减压浓缩至无醇味；

（2）萃取：取步骤（1）所得浓缩液，加1～5倍量的石油醚萃取3～8次，弃石油醚层，取水层；在水层中加1～5倍量的正丁醇萃取3～8次，收集合并正丁醇层，将其浓缩至干,得到浸膏；

（3）沉淀：将步骤（2）所得浸膏中加入液固比为6～10ml/g的甲醇溶解，再加入甲醇量的0.1～0.6倍乙醚（优选0.3倍），混匀、静置，待沉淀析出，减压抽滤得到沉淀，即石刁柏皂苷粗品；

（4）纯化：将步骤（3）所得沉淀过硅胶柱，以氯仿和甲醇梯度配比的混合溶剂依次洗脱，用薄层色谱对各流份进行检测；收集含石刁柏皂苷的流份，30℃减压浓缩，即得到石刁柏皂苷。

所述步骤（4）中氯仿和甲醇混合溶剂梯度配比优选90:10、85:15、80:20。

本发明的优点是：从原料开始经过简单的提取、两次萃取、一次沉淀，过一次硅胶柱可以得到石刁柏皂苷纯品。本发明分离提取方法操作步骤简单，环境污染小，成本较低，石刁柏皂苷纯度可达98%以上。其可作为化学对照品，用于石刁柏药材、提取物及制剂的质量控制。

附图说明

图1为本发明实施例1制备的石刁柏皂苷的HPLC图谱

具体实施方式：

实施例1

称取150g干燥石刁柏粉末，加1L75%乙醇进行回流提取，温度为70℃，时间为2h，提取三次，过滤，合并滤液。用旋转蒸发仪进行浓缩，浓缩至无乙醇味为止，得浓缩液100ml。将浓缩液倒入500ml梨形分液漏斗进行萃取，加入石油醚200ml，萃取5次弃石油醚层，收集水层。将剩余水层加入200ml正丁醇萃取3次。收集并合并正丁醇层，在旋转蒸发仪上旋干,得到粗提物。加入50ml甲醇溶解正丁醇层的提取物，待提取物溶解后加入10ml乙醚，静置，待沉淀析出，减压抽滤得到沉淀0.3327g。

用硅胶柱色谱柱分离方法，以氯仿：甲醇=95:5系统湿法装柱，依次采用氯仿：甲醇=90:10、氯仿：甲醇=85:15、氯仿：甲醇=80:20的溶剂系统依次梯度洗脱，采用薄层色谱对各流分进行检测，薄层色谱条件为氯仿：甲醇=9:3:0.1，最后收集氯仿：甲醇=80:20系统所接的流份，在旋转蒸发仪上挥干溶剂后得到石刁柏皂苷纯品，得率为0.067%。

实施例2