[发明专利]一种产连翘脂苷A、B和连翘苷的连翘内生真菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种产连翘脂苷A、B和连翘苷的连翘内生真菌及其应用，属于生物技术领域。 

背景技术

从微生物中寻找能应用于农业和医药的天然产物是一个不断变化发展的过程。这些潜在的菌种资源对研究生物多样性、发现新化合物和开发新药都具有重要的意义。内生真菌次生代谢产物的化学结构多样性也蕴藏着其生物活性的多样性，在农业和医药业中具有重要的应用潜力。在过去70多年中，已从微生物中发现了3万～5万种天然产物，其中1万多种有生物活性，8千多种具有抗菌或抗肿瘤活性。从微生物中获得的抗生素、抗肿瘤剂、杀虫剂、以及微生物产生的酶、维生素和氨基酸等都有广泛应用。 

植物内生真菌是个巨大的微生物新资源，具有重要的农药和医药应用潜力。从特殊生境植物和传统的药用植物内生真菌次生代谢产物中筛选具有药用价值的活性物质或新型化合物以创制新药，解决自然资源不足，开发紧缺及新型药物，将在很大程度上丰富人类的药物宝库。 

连翘出自《神农本草经》，其别名又有旱连子、空翘、落翘、黄奇丹，为植物连翘的干燥果实。其对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、肺炎双球菌、人型结核杆菌、百日咳杆菌，以及流感病毒、真菌、鼻病毒等均有抑制作用。能明显抑制炎性渗出和增强小鼠吞噬炎症细胞能力。水溶液能降压，所含芦丁能增强毛细血管致密度。此外，还有解热、利尿、镇吐、抗肝损伤等作用。 

发明内容

本发明的目的是提供一种产连翘脂苷A、B和连翘苷的连翘内生真菌。 

同时，本发明还提供一种产连翘脂苷A、B和连翘苷的连翘内生真菌的应用。 

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是： 

一种产连翘脂苷A、B和连翘苷的连翘内生真菌，所述的连翘内生真菌为枝状枝孢(Cladosporium cladosporioides)，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2014年1月15日，保藏编号：CGMCC No.8728。 

一种产连翘脂苷A、B和连翘苷的连翘内生真菌的应用，具体的，连翘内生真菌在生 产药物活性成分（连翘脂苷A、B和连翘苷）中的应用，包括以下步骤：取连翘内生真菌（CGMCC No.8728）发酵培养液，分离药物活性成分即可。更具体的，连翘内生真菌在制备药物中的应用，包括以下步骤：取连翘内生真菌（CGMCC No.8728）发酵培养液，分离药物活性成分，与辅料混合即可。 

所述的药物活性成分为连翘脂苷A、连翘脂苷B和连翘苷，经分离、纯化后，可以按照常规方法制备成片剂、颗粒剂、粉剂、注射液、口服液、脂质体等剂型。所述的辅料为医药、农药领域常规辅料。当制备成注射液时，辅料可采用甘露醇、葡萄糖、山梨醇等，片剂时采用淀粉、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素等；口服液时采用油性基质如脂肪酸、脂肪酸甘油酯等。 

所述发酵培养液的制备方法为：取经活化的连翘内生真菌置于PDB培养基中，在27～29℃下震荡培养4～7天即可。 

本发明的有益效果： 

本发明中连翘内生真菌为枝胞菌黑霉菌（Cladosporium cladosporioides），从河南省洛阳市周山风景区的连翘活体中分离得到，属于一种共生微生物，可以代谢产生与连翘成分相同的成分，具有很强的杀灭和抑制细菌的作用，发酵培养后能够产生对致病性大肠杆菌（E.coli K99，ATCC hb-8178)）、沙门氏菌（Salmonella.Typhimurium，ATCC14028）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus.aureus，ATCC29213）等有抑制作用的活性代谢产物，包括连翘脂苷A、B和连翘苷等，是医药行业重要的微生物资源。 

附图说明

图1为本发明实施例1中连翘内生真菌在100×油镜下的菌株形态图； 

图2为实施例1中连翘内生真菌18s rDNA PCR扩增产物的电泳图； 

图3为实施例1中连翘内生真菌的系统发育树图； 

图4中实施例2中连翘内生真菌的抑菌效果图； 

图5为实施例2中连翘内生真菌发酵上清液的液相色谱图。 

具体实施方式

下述实施例仅对本发明作进一步详细说明，但不构成对本发明的任何限制。 

实施例1