[发明专利]一种用于单细胞胶电泳实验的新型基片

说明书

技术领域

本发明涉属于细胞生物学、环境基因毒性检测、生物监测、药物遗传毒性等实验检测领域，具体涉及一种用于单细胞胶电泳实验的新型基片。

背景技术

单细胞凝胶电泳分析(single cell gel eletrophoresis,SCGE)是Ostling等(1984)首创，后经Singh等(1988)进一步完善而逐渐发展起来的一种快速检测单细胞DNA损伤的实验方法,因其细胞经过电泳后，受损细胞核DNA染色形状颇似慧星,又称慧星试验(cometassay)。

该技术的原理是基于有核细胞的DNA分子量很大，在DNA超螺旋结构附着在核基质中，用琼脂糖凝胶将细胞包埋在载玻片上，在细胞裂解液作用下，细胞膜、核膜及其他生物膜破坏，使细胞内的RNA、蛋白质及其他成分进入凝胶，继而扩散到裂解液中，惟独核DNA仍保持缠绕的环区附着在剩余的核骨架上，并留在原位。如果细胞未受损伤，电泳中核DNA因其分子量大而停留在核基质中，经荧光染色后呈现圆形的荧光团，无拖尾现象。若细胞受损，在碱性电泳液（pH>13）中，先是DNA双链解螺旋且碱变性为单链，单链断裂的碎片分子量小即可进入凝胶中，在电泳时断链或碎片离开DNA向阳极迁移，形成拖尾。细胞核DNA损伤愈重，产生的断链或碱易变性片段就愈多，其断链或短片也就愈小，在电场作用下迁移的DNA量多，迁移的距离长，表现为尾长增加和尾部荧光强度增强。因此，通过测定DNA迁移部分的光密度或迁移长度就可定量测定单个细胞DNA损伤程度。

在单细胞凝胶电泳实验中，在普通载玻片上铺设的琼脂糖凝胶，进行细胞裂解、洗涤、电泳等多个步骤时，凝胶在普通载玻片上十分容易漂移、断裂，甚至脱落。该实验分析一个指标需要进行多个样品支持，需要在多个普通载玻片上铺胶，过程十分繁琐。在普通载玻片上铺胶，厚度往往不能控制，样品间的由于琼脂糖凝胶的厚度差别，在显微镜下观察时，细胞的形态容易有差别，影响定量分析结果。在铺设含有细胞的低熔点琼脂糖凝胶时，常有部分低熔点琼脂糖凝胶超出第一层普通琼脂糖凝胶，和玻璃面直接接触，由于玻璃的吸附作用，致使与玻璃面直接接触的细胞产生假阳性结果。

为了解决上述由普通载玻片带来的不便和误差，我们发明了一种用于单细胞凝胶电泳实验的新型基片。该发明可以确保单细胞凝胶电泳实验过程中铺胶厚度均匀、一致，加快实验进程，减轻人工铺胶工作量；同时保障后续定量分析结果可靠。

发明内容

本发明涉及一种用于单细胞凝胶电泳实验的新型基片。

本发明提出的用于单细胞凝胶电泳实验的新型基片，由载物片1、冠状面卡槽2、水平面挡板3和水平面卡槽4构成，其中：冠状面卡槽2、水平面挡板3和水平面卡槽4组成铺设装置，冠状面卡槽2和水平面卡槽4交替叠置布置于载物片1上方，水平面卡槽4与载物片1之间留有空隙，用于铺设凝胶；冠状面卡槽2和水平面卡槽4两侧设有水平面挡板3；冠状面卡槽2可以插入疏水硬质卡片，水平面卡槽4可以插入疏水硬质透明卡片；使用时，疏水硬质卡片插入铺胶装置两侧冠状面卡槽2内，制备第一层凝胶：将疏水硬质透明卡片插入第二层水平面卡槽4内，在第一层水平面卡槽4插口一侧缓慢注入完全熔解的高熔点琼脂糖，室温静置，待完全凝固后缓慢拉出疏水硬质透明卡片。制备第二层凝胶：将一张新的疏水硬质透明卡片插入第三层水平面卡槽4内，在第二层水平面卡槽4插口一侧缓慢注入熔解状态的低熔点琼脂糖，室温静置，待完全凝固后缓慢拉出疏水硬质透明卡片。制备第三层凝胶：将一张新的疏水硬质透明卡片插入第四层水平面卡槽4内，在第三层水平面卡槽4插口一侧缓慢注入熔解状态的低熔点琼脂糖，室温静置，待完全凝固后缓慢拉出疏水硬质透明卡片，依次类推制备成若干成凝胶。

本发明的有益效果在于：所述新型基片解决了单细胞凝胶电泳实验因为不同课题组或者实验人员凝胶制备方法差异导致的实验结果差异非常大的问题，可以使得单细胞凝胶电泳实验制备的凝胶大小、厚度标准化；与传统单细胞凝胶电泳实验所用的普通载玻片或者经过处理后防止DNA吸附的载玻片相比较，使用所述的新型基片可以更加快速的制备凝胶，制备步骤更为简单，所制备的凝胶厚度均一，避免后续彗星图像分析受凝胶厚薄不均一影响；凝胶电泳后，不同实验操作人员所获得的彗星图像重复性和可比较性更好。

附图说明

图1为一种用于单细胞凝胶电泳实验的新型基片结构示意图。

图2为基片俯视图。

图3为基片矢状面侧面图。

图4为基片中部冠状面图。