[发明专利]一种小鼠RANKL突变体表达载体及其构建、表达及应用

权利要求书

1.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体为带有FLAG标签的含有如SEQ.IDNO：16、SEQ.IDNO：17、SEQ.IDNO：18、SEQ.IDNO：19、SEQ.IDNO：20、SEQ.IDNO：21、SEQ.IDNO：22、SEQ.IDNO：23、SEQ.IDNO：24、SEQ.IDNO：25、SEQ.IDNO：26、SEQ.IDNO：27、SEQ.IDNO：28、SEQ.IDNO：29或SEQ.IDNO：30所示核苷酸序列的小鼠RANKL突变体基因的载体。

2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体是通过将所述小鼠RANKL突变体基因克隆至pFLAG-C1载体中的MCS区域获得的。

3.根据权利要求1或2所述的表达载体，其特征在于，所述pFLAG-C1载体是以pCMV-N-Flag和pEGFP-C1为出发载体通过基因重组获得的。

4.一种构建权利要求1-3任一所述的表达载体的方法，其特征在于，包括使用限制性内切酶NheⅠ和BglⅡ双酶切质粒pCMV-N-Flag和pEGFP-C1，进行基因重组操作的步骤，将pCMV-N-Flag载体中的FLAG标签替换至pEGFP-C1载体的EGFP标签位置，且pEGFP-C1载体的EGFP标签被完全替换掉。

5.一种含有权利要求1-4任一所述的表达载体的重组细胞，其特征在于，由权利要求1-4任一所述的表达载体转染的HEK293细胞。

6.一种构建权利要求5所述重组细胞的方法，其特征在于，取权利要求1-4任一所述的表达载体转染入HEK293细胞株中，经过抗性筛选，即得表达带有FLAG标签的小鼠RANKL突变体的细胞。

7.一种如权利要求6所述的重组细胞在细胞染色、免疫印迹和免疫沉淀试验中的应用。

8.一种重组细胞表达系统，其特征在于，所述表达系统为分别将权利要求1-4任一所述的各个表达载体转染入细胞得到的细胞总和。

9.一种如权利要求8所述的表达系统在细胞染色、免疫印迹和免疫沉淀试验中的应用。