[发明专利]一种用于双表位展示的噬菌体载体及其构建方法

权利要求书

1.用于双表位展示的噬菌体载体，为含有源自丝状噬菌体的用于展示外源肽1的pⅢ蛋白和用于展示外源肽2的pⅧ蛋白的编码基因的环形载体；

所述pⅢ蛋白的编码基因源自噬菌体载体fUSE55；所述pⅧ蛋白的编码基因源自噬菌体载体f88-4；

所述用于双表位展示的噬菌体载体，是按照包括如下步骤的方法制备获得的：

(1)以噬菌体载体f88-4为模板，采用引物1和引物2进行PCR扩增，得到PCR产物；

所述引物1为根据所述噬菌体载体f88-4上酶切位点MscI上游的序列设计的正向引物；所述引物2为根据所述菌体载体f88-4上酶切位点SacII下游的序列设计的反向引物；

(2)用限制性内切酶MscI和SacII双酶切步骤(1)所得PCR产物，将酶切产物胶回收后与经过限制性内切酶MscI和SacII双酶切的噬菌体载体fUSE55的骨架片段相连，得到所述用于双表位展示的噬菌体载体。

2.根据权利要求1所述的用于双表位展示的噬菌体载体，其特征在于：所述pⅢ蛋白的编码基因为序列表中序列1的第1589-2876位；所述pⅧ蛋白的编码基因为序列表中序列1的第5771-6001位。

3.根据权利要求1或2所述的用于双表位展示的噬菌体载体，其特征在于：所述用于双表位展示的噬菌体载体的序列为序列表中序列1。

4.制备权利要求1-3中任一所述的用于双表位展示的噬菌体载体的方法，包括如下步骤：

(1)以噬菌体载体f88-4为模板，采用引物1和引物2进行PCR扩增，得到PCR产物；

所述引物1为根据所述噬菌体载体f88-4上酶切位点MscI上游的序列设计的正向引物；所述引物2为根据所述菌体载体f88-4上酶切位点SacII下游的序列设计的反向引物；

(2)用限制性内切酶MscI和SacII双酶切步骤(1)所得PCR产物，将酶切产物胶回收后与经过限制性内切酶MscI和SacII双酶切的噬菌体载体fUSE55的骨架片段相连，得到所述用于双表位展示的噬菌体载体。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述引物1为序列表中序列2所示单链DNA分子；所述引物2为序列表中序列3所示单链DNA分子。

6.权利要求1-3中任一所述的用于双表位展示的噬菌体载体在展示两种不同外源肽中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述应用中，所述两种不同外源肽分别直接融合于权利要求1或2中所述的pⅢ蛋白的氨基末端以及权利要求1或2中所述的pⅧ蛋白的氨基末端。

8.利用权利要求1-3中任一所述的用于双表位展示的噬菌体载体展示两种不同外源肽的方法，包括如下步骤：

(a)将所述两种不同外源肽的编码基因分别插入到权利要求1或2中所述的pⅢ蛋白的编码基因的两个酶切位点BglI之间，以及权利要求1或2中所述的pⅧ蛋白的编码基因的酶切位点PstI和Hind III之间，得到重组噬菌体载体；

(b)利用步骤(a)得到的所述重组噬菌体载体包装得到重组噬菌体；所述重组噬菌体上展示所述两种不同外源肽。

9.利用权利要求8所述的方法制备得到的重组噬菌体。