[发明专利]用于给禽类经眼施用疫苗的包含壳聚糖的组合物

说明书

本申请是申请日为2009年9月4日、申请号为200980138635.5的同名申请的分案申请。

发明领域

本发明涉及通过经眼途径给禽类物种施用的包含壳聚糖(chitosan)和疫苗的疫苗组合物以及接种的方法或程序(其包括使用壳聚糖以增加或增强禽类物种中对疫苗的免疫应答)。

发明背景

疫苗是给受试者施用以通过诱导对特定微生物(例如细菌或病毒或寄生虫)的主动免疫来增强对感染的抗性的抗原性材料的制剂。可将疫苗与佐剂共施用以增强免疫应答。佐剂的实例包括增强免疫系统对抗原的应答的化学和多肽免疫刺激剂。此类佐剂可包括例如氢氧化铝、磷酸铝、植物和动物油以及矿物油、细菌毒素、几丁质(chitin)衍生物和壳聚糖等，可将佐剂以足以增强免疫应答的量与疫苗一起施用。

通常通过胃肠外注射例如皮下或肌内注射施用疫苗和佐剂。特别地，对于治疗上呼吸道的感染，还可进行至多种动物物种的鼻粘膜的直接施用。例如，欧洲专利EP865297B1描述了将来自病原体的蛋白质或多糖抗原和作为佐剂的壳聚糖鼻内共施用至小鼠。通过气雾剂、滴剂或吹入法将此类鼻内组合物配制为微球体形式的干粉，并且通过另外的几次连续鼻内施用允许增强IgA粘膜体液和IgG全身性免疫应答。

申请人现已发现，在相同的接种程序中与禽类疫苗组合使用的壳聚糖具有极大地增强细胞介导的免疫应答同时维持已接种的鸟类的高体液和全身性免疫应答的潜力(当通过经眼途径施用时)。此外，已发现，壳聚糖作用于禽类结膜并且导致疫苗在禽类组织中的存留(persistence)显著增加。

发明概述

本发明涉及经眼施用给禽类物种的疫苗组合物，其包含一种或多种疫苗和有效佐剂量的壳聚糖。本发明还涉及免疫禽类物种的方法，其包括给禽类物种经眼施用疫苗组合物，以及一种或多种疫苗与壳聚糖的组合在制造用于经眼施用以有效地免疫禽类物种抵抗感染性疾病的疫苗组合物中的用途。本发明还涉及禽类接种试剂盒，其包括疫苗组合物和用于所述疫苗组合物的经眼施用的工具或装置。

附图概述

图1:举例说明接种的时间线。

图2:举例说明抗原回忆(antigen recall)方案。

图3:显示如在经眼施用具有或不具有壳聚糖的VITAPEST L(Ceva Phylaxia,Hungary)后2至5周测量的鸡γ-干扰素的产量水平(光密度)。

图4:显示已通过经眼途径接受具有或不具有壳聚糖的UNI L或VITAPEST L的SPF鸡的禽类组织中以卵感染剂量(EID₅₀)表示的新城疫(ND)疫苗株的滴度。

图5:显示已通过经眼途径接受具有或不具有壳聚糖的UNI L(Ceva Phylaxia,Hungary)或VITAPEST L的常规蛋鸡的禽类组织中以卵感染剂量(EID₅₀)表示的新城疫疫苗株的滴度。

图6A和6B:显示在用活新城疫疫苗(NDV)接种SPF鸡(图6A)和常规蛋鸡(图6B)后的免疫活性和特异性细胞介导的免疫。通过经眼途径，在一日龄时用单独的VITAPEST L(黑色柱)或与壳聚糖组合的VITAPEST L(灰色柱)接种鸟类。未接种的动物以白色柱标示。用PMA/Iono丝裂原(0.1μg/ml)gp-NDV回忆抗原(1μg/ml)刺激脾细胞，在72小时的活化后收获被刺激的细胞的上清液。通过ChIFNγ捕获ELISA测定ChIFNγ的产量。结果相应于在各时间点上的光密度(O.D.)的平均值±标准差(n=5)。具有不同上标的平均值±标准差差异显著(P<0.05)。

图7A和7B:显示在用活ND疫苗接种SPF鸡(图7A)和常规蛋鸡(图7B)后眼泪(lachrymal)抗体介导的免疫。在一日龄时通过经眼途径用单独的(黑色柱)或与壳聚糖组合的(灰色柱)VITAPEST L接种鸟类。未接种的动物以白色柱标示。数据表示在接种后指定的时间上通过ELISA测定的吸光度值(O.D.)的平均值±标准差(n=5)。将泪液样品以1:4(对于IgA/G)和1:32(对于IgM)稀释。具有不同上标的时间点上的平均值±标准差差异显著(P<0.05)。N.D.=由于在NDV特异性IgA和IgG测量后剩余有限量的样品而未测定的。