[发明专利]一种检测低丰度分子改变的方法有效
| 申请号： | 201410156661.3 | 申请日： | 2014-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN103898232A | 公开（公告）日： | 2014-07-02 |
| 发明（设计）人： | 邹鸿志;傅新晖;陈志婷;麦炽雄;黄京林 | 申请（专利权）人： | 汪建平;邹鸿志;傅新晖 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 陈卫 |
| 地址： | 510655 广东省广州市天*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 低丰度 分子 改变 方法 | ||
1.一种使用digital HRM方法检测KRAS 基因突变的引物对KRAS-76-F/KRAS-76-R，其特征在于，所述KRAS-76-F引物序列如SEQ ID NO：1所示，KRAS-76-R引物序列如SEQ ID NO：2所示。
2.一种使用digital HRM方法检测KRAS 基因突变的方法，其特征在于，使用引物对KRAS-76-F/KRAS-76-R，通过digital HRM方法来检测待测标本的KRAS 基因突变情况；所述KRAS-76-F引物序列如SEQ ID NO：1所示，所述KRAS-76-R引物序列如SEQ ID NO：2所示；所述待测标本为所有样本，包括正常样本、质量较差样本、片段化严重样本或者陈旧样本。
3.根据权利要求2所述检测KRAS基因突变的方法，其特征在于，所述质量较差样本为样品浓度低于50ng/μl，纯度低于1.6或大于2.0的样本。
4.根据权利要求2所述检测KRAS基因突变的方法，其特征在于，所述陈旧样本为组织标本经石蜡包埋后3~8年的样本。
5.根据权利要求2至4任一项所述检测KRAS基因突变的方法，其特征在于，所述正常样本、质量较差样本、片段化严重样本或者陈旧样本为肠癌、胃癌、肺癌、食管癌、盆腔粘液腺癌、胰腺恶性内分泌肿瘤或肛管腺癌的正常样本、质量较差样本、片段化严重样本或者陈旧样本。
6.根据权利要求2所述检测KRAS基因突变的方法，其特征在于，所述检测方法亦适用于患者的粪便标本和血液标本的KRAS 基因4-14号密码子突变检测。
7.根据权利要求2所述检测KRAS基因突变的方法，其特征在于，使用digital HRM方法检测KRAS基因突变的方法具体为：在进行PCR扩增前，对样品DNA进行充分稀释，令样品DNA的浓度＜50ng/μl，以稀释后的样品DNA为模板，配制2个以上的独立扩增体系，全部进行PCR扩增，扩增结束后对每个反应体系中的PCR产物逐一分析熔解曲线，只要有一个反应体系检测出突变型模板的熔解峰，则判断该样品为突变型样品。
8.一种使用digital HRM方法检测KRAS基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物对KRAS-76-F/KRAS-76-R。
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