[发明专利]一种辅助诊断冠心病的检测试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及冠心病的辅助诊断技术领域，特别涉及一种辅助诊断冠心病的检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

冠心病亦称为缺血性心脏病(coronary heart disease, CHD)，涉及供应心肌血液的动脉发生粥样硬化，即冠状动脉粥样硬化导致血管腔狭窄或斑块形成甚至破裂、完全堵塞，限制或完全中断了心肌的血液供应，引起临床上心绞痛、心肌梗死等一系列严重的心肌缺血病症。冠心病是现今威胁人类健康最严重的疾病之一，人类健康的主要杀手。随着经济快速发展，世界范围的疾病谱发生了明显的变化，心血管疾病逐渐成为了主要疾病。在2008年大概有1730万人死于心血管病，占全球死亡人数的30%。其中，死于冠心病的约有730万，占了总数的近42%。有流行病学研究显示，到2020年，每年将有2500万人死于心血管疾病，且心血管疾病预计将超过传染性疾病成为全球死亡和残疾的主要原因。虽然据世界卫生组织MONICA资料统计，我国发病率较西方国家低，但我国冠心病发病率呈逐渐上升趋势。冠心病的发生是许多因素参与的复杂过程，是环境因素和遗传因素共同作用的结果。众所周知,冠心病的发病与吸烟，饮酒，肥胖，高血压，糖尿病，血脂异常等有关。但遗传因素起了独特的作用，特别是家族遗传因素是冠心病的一个重要独立危险因素。基因检测可对冠心病防治做出巨大贡献，发展疾病诊断和治疗新手段，具有很大前景。

研究发现，血脂异常与冠心病的发生有很大的关系，据统计冠心病患者血清中低密度脂蛋白(LDL-C)，甘油三酯(TG)，总胆固醇(TC)明显高于非冠心病患者，而高密度脂蛋白(HDL-C)明显低于非冠心病患者。而且国内外已发现SNPrs7259620和rs662799与TC,TG,LDL-C,HDL-C等存在相关性。而血脂异常还与其他很多疾病有关，如代谢综合征，脑卒中，中风，肾衰，阿尔兹海默症等。故我们可能可以通过检测SNPrs7259620和rs662799与其他相关疾病的相关性，辅助判断，做到提早预防及用药参考等。

单核苷酸多态性(SNP)是指基因组DNA中某一特定核苷酸位置上发生转换、颠换、插入或缺失等变化，是第三代分子标记。据估计，大约有10亿个SNP分子标记将被用于基因功能及与疾病的相关性的关联研究。国内外已经有部分有关于rs7259620和rs662799与冠心病相关性的研究。APOE即载脂蛋白E，具有多态性，多态性决定个体血脂水平与动脉粥样硬化发生发展密切相关，是动脉粥样硬化早期及发展过程中个体差异的主要原因，增加冠心病风险。对于rs662799，国外研究发现APOA5启动子区域多态性为冠心病发生的独立危险因素，与其发生存在强相关性。但目前，国内外还没有公开任何用于检测APOE基因rs7259620和APOA5基因rs662799单核苷酸多态性(SNP)与冠心病相关程度的试剂盒的相关研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，提供检测方便、检测准确率高的一种辅助诊断冠心病的检测试剂盒；通过基因引物对样品DNA进行PCR扩增，并建立熔解曲线与标准熔解曲线相比较得出结论，其检测方法简单、高效。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：

一种辅助诊断冠心病的检测试剂盒，所述的检测试剂盒包含用于检测APOE基因rs7259620单核苷酸多态性的APOE基因引物和用于检测APOA5基因rs662799单核苷酸多态性的APOA5基因引物；

所述的APOE基因引物为包括以下序列的核苷酸片段：

APOE基因特异性上游引物一：5’-gcgggcagggcggcTCACTGTGTGGTTTTGCCATTCg-3’；

APOE基因特异性上游引物二：5’-gcgggcTCACTGTGTGGTTTTGCCATTCa-3’；

APOE基因反向测序引物：5’-AACCCGTGGTTCAGCAGCAAGA-3’；

所述的APOA5基因引物为包括以下序列的核苷酸片段：

APOA5基因特异性上游引物一：5’-gcgggcagggcggcCCAGGAACTGGAGCGAAAGTg-3’；

APOA5基因特异性上游引物二：5’-gcgggcCCAGGAACTGGAGCGAAAGTa-3’；

APOA5基因反向测序引物：5’-CCCTGCGAGTGGAGTTAGCTT-3’。

为优化上述技术方案，采取的具体措施还包括：

所述的APOE基因引物为：