[发明专利]抗真菌药物制剂的无菌检测方法

说明书

技术领域

本发明属于药物分析技术领域。具体地说，本发明涉及一种抗真菌药物制剂的无菌检测方法，更特别地说，本发明涉及抗真菌药物卡泊芬净制剂的无菌检测方法。

背景技术

临床上常用的抗真菌菌药物有注射用卡泊芬净、氟康唑氯化钠注射液、氟康唑注射液、氟康唑注射液(大扶康)和注射用伏立康唑(威凡)等。卡泊芬净与目前已经注册的抗真菌药物相比，其毒性低，安全性好，它是一种半合成脂肽，属16环脂肽，属于新型的抗真菌药，是第一个批准用于临床的棘白菌素。它能抑制真菌细胞壁的重要组成成分β(1,3)-D-葡聚糖的合成，而β(1,3)-D-葡聚糖是敏感真菌如曲霉菌、念珠菌等细胞壁的重要组分。药物毒性低，对大多数分离的念珠菌属均有快速杀菌作用，对其他抗真菌药耐药的真菌亦有较强的抗菌活性，且因其良好的药代动力学特性而可每日1次给药，故在临床上常常使用。体外研究显示，卡泊芬净对白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌的抗菌活性与喹类、两性霉素B和氟胞嘧啶抗真菌药物相当或更优，其MIC90值为l mg/L，甚至更低。

注射类产品中微生物污染的危害性，各国药典及药物分析人员均十分重视。无菌检查方法的研究，目的是找到有效、合理和科学的检查方法。注射用药品，在生产过程中，均会有一定的灭菌和无菌保证方法，但是，往往是这样的措施使污染的微生物受到损伤，使微生物处于休眠或者亚致死状态；另外抗菌药物本身对微生物的有抑制或杀灭作用。但是，受损伤、处于休眠或亚致死状态的微生物进入人体后，在体液营养相对良好的条件下，微生物会复苏、繁殖，以致影响人体的健康，甚至是威胁生命。因此，在药品的无菌检查过程中，通常是要消除产品本身对微生物的抑制作用，使受损伤、处于休眠或亚致死状态的微生物在良好的营养条件下复苏、生长繁殖，从而得以客观地检出产品是否受微生物污染，以此来保证药品的安全。

卡泊芬净是迄今获准上市的第一个棘白霉素类新型抗真菌药物，用于治疗念珠菌病、对标准疗法无效或不能耐受患者的侵袭性曲霉菌病，它对真菌的抑制作用决定了其在无菌方法建立上的难度非常大。即使采用薄膜过滤法，经过稀释液(如0.9氯化钠溶液或者0.1%蛋白胨水溶液)的稀释，通过大量的冲洗液冲洗滤膜(超过1000mL/膜)，阳性对照菌白色念珠菌仍无法生长。这说明，薄膜过滤器中残留的微量抗真菌药物卡泊芬净可影响检验过程中微生物的正常生长，目前的方法是加大冲洗量，但依靠这单一的手段，无法彻底去除残留的抗真菌药物，另外，过量的冲洗也是无菌检查过程中不允许的。因为过量超量的冲洗，可能造成滤膜孔径的变化使检验结果无效，也可能因为长时间液体的剪切力造成微生物的损伤和死亡，出现漏检的情况。

因此，对于抗真菌药物制剂特别是卡泊芬净注射制剂的无菌检查，本领域技术人员期待找到一种有效、科学、合理且可操作性强的检测方法，既可减少薄膜过滤法中滤膜的吸附作用，利用较少的冲洗量即可达到比较彻底的消除抑菌作用的效果；同时，能够更方便、更准确地得到药品的无菌检查结果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种有效、科学、合理且可操作性强的检测抗真菌药物特别是卡泊芬净注射制剂的无菌检查方法，期待该方法既可减少薄膜过滤法中滤膜的吸附作用，利用较少的冲洗量即可达到比较彻底的消除抑菌作用的效果；同时，能够更方便、更准确地得到药品的无菌检查结果。本发明人在抗真菌药物制剂的无菌检验的研究中，令人惊奇地发现了一种检验方法，采用特定的环糊精溶液为冲洗液，经薄膜过滤法，同时真菌培养基采用改良马丁和/或胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB)，其中含约10%环糊精，可以有效地执行抗真菌类药物特别是卡泊芬净的无菌检验。

为此，本发明第一方面提供了一种抗真菌药物制剂的无菌检测方法，该方法包括如下步骤：

(1)配制冲洗液：取环糊精或其衍生物，用水溶解得到溶液，分装，121℃灭菌15min，即得；

(2)配制供试液：取抗真菌药物制剂，分别全部转移至0.9%无菌氯化钠溶液中，即得；

(3)薄膜过滤和冲洗：将步骤(2)得到的供试液进行薄膜过滤，用步骤(1)得到的冲洗液分次冲洗；

(4)检查：照2012年版中国药典二部(2010年版的中华人民共和国药典二部，国家药典委员会编，中国医药科技出版社出版，ISBN978-7-5067-4438-6，其在本发明中可简称为2012年版中国药典二部)附录XI H无菌检查法进行检查，以黑曲霉为阳性对照菌，真菌培养基采用改良马丁培养基或胰蛋白胨大豆肉汤培养基(其通常亦简称为TSB)。