[发明专利]一种先天性无虹膜症致病基因、检测该基因的试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种基因检测试剂盒及其应用，具体地说是涉及一种先天性无虹膜症致病基因检测试剂盒及其应用。本发明属于疾病检测与诊断技术领域。

背景技术

无虹膜症是双眼发育性疾患，主要特征为先天性虹膜发育不良或正常虹膜的缺如，还可伴有多种眼疾，如角膜浑浊、小角膜、晶状体脱位、白内障、青光眼、黄斑发育不良、斜视、眼球震颤等，累及全眼球。

由于虹膜缺损程度不同，故临床表现不一，但都有畏光、皱眉及眯眼等表现，视力差并可能进行性减退。临床上有些患眼用手电筒或在裂隙灯检查时就可看见残存的周边虹膜，而有些只能在房角镜下才能见到残余的虹膜根部组织。较多患者早期就有周边角膜血管翳及角膜浑浊，随年龄增长逐渐发展至角膜中央部。偶有小角膜、角膜硬化症及角膜与晶状体粘连的情况。晶状体发育异常以先天性局限性晶状体浑浊为多见，亦可有晶状体异位或先天性缺损，发生进行性的白内障则可使视力明显减退。无虹膜亦可伴有脉络膜缺损、瞳孔残膜、小视神经乳头、斜视及上睑下垂等，如伴黄斑中心的发育不良可导致眼球震颤。无虹膜患者当伴有青光眼时，残留的虹膜则逐渐向前覆盖到小梁网，一旦功能小梁被阻挡，眼压就会逐渐升高，青光眼的严重程度与房角粘连情况有关。

先天性无虹膜症男女两性发病相同，可以孤立发生，可以合并其它眼部发育异常，或者是遗传性多系统综合症的一部分。约有2/3的无虹膜患者有家族史，为常染色体显性遗传；1/3的患者呈散发性，多为隐性遗传。其遗传基础和发病机制尚不十分清楚。对先天性无虹膜症致病基因的突变检测是了解其发病的分子机制的重要步骤。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种新的先天性无虹膜症致病基因；

本发明的目的之二在于提供所述先天性无虹膜症致病基因在制备诊断或检测先天性无虹膜症试剂中的应用；

本发明的目的之三在于提供一种可用于上述先天性无虹膜症致病基因检测的试剂盒；

本发明的目的之四在于提供所述试剂盒在制备诊断或检测先天性无虹膜症试剂中的应用。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明的一种先天性无虹膜症致病基因，其特征在于所述的致病基因是突变的PAX6基因（Paired box6），该PAX6基因的第6外显子的第323位碱基（以cDNA第一个核苷酸作为1计算），有一个C->A的点突变。

该PAX6基因的gDNA Gene Bank登录号为NC_000011，cDNA的Gene Bank登录号为NM_001604，所对应的蛋白质的Gene Bank登录号为NP_001595。

突变前的PAX6基因的第6外显子的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，突变后的PAX6基因的第6外显子的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

该突变导致编码第108位丝氨酸的遗传密码子（TCC）变成酪氨酸的遗传密码子（TAC），即发生了S108Y突变。

进一步的，本发明还提出了所述的先天性无虹膜症致病基因在制备诊断或检测先天性无虹膜症试剂中的应用。

本发明的一种用于先天性无虹膜症致病基因检测的试剂盒，包括：2mM dNTPs，10×PCR反应缓冲液，DNA聚合酶，PCR扩增引物对和双蒸水，其特征在于：所述的PCR扩增引物对由引物1和引物2组成，其中，引物1的核苷酸序列为：CGTAAGCTTGTCATTGTTTAATGC（SEQ ID NO:1所示），引物2的核苷酸序列为AGAGAGGGTGGGAGGAGGTA（SEQ ID NO:2所示）。

该试剂盒用于先天性无虹膜症致病基因的扩增，其采用Touch-down PCR进行扩增，反应程序为：

95℃预变性2分钟，然后进入第一个循环，95℃变性40秒，63℃退火复性30秒，72℃延伸1min，之后每循环一次降低0.5℃，共进行14个循环，之后进入主循环，95℃变性40秒，57℃退火复性30秒，72℃延伸1min，共进行25个循环，72℃延伸10min，4℃保存，表2所示。

进一步的，本发明还提出了所述的一种先天性无虹膜症致病基因检测试剂盒在制备诊断或检测先天性无虹膜症试剂中的应用。

一种利用本发明的试剂盒检测先天性无虹膜症致病基因的方法，包括以下步骤：

（1）使用QIAGEN公司QIAamp DNA Blood Mini Kit试剂盒抽提血液样品基因组DNA；

（2）设计引物：