[发明专利]一种包裹有超氧化物歧化酶聚电解质微囊的制备方法

说明书

一种包裹有铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn‑SOD)聚电解质微囊的制备方法，是基于层层自组装原理，采用阴离子聚电解质聚苯乙烯磺酸钠[poly(sodium styrene sulfonate)，PSS]和阳离子聚电解质聚烯丙基胺盐酸盐[poly(allyamine hydrochloride)，PAH]作为聚电解质微囊组装材料，将具有抗氧化功能的Cu/Zn‑SOD包裹于微囊之中，该微囊可以有效阻隔胰蛋白酶等其他水解酶类与Cu/Zn‑SOD接触，但是又不影响溶液中离子在膜内外的进出，Cu/Zn‑SOD可以与体系中超氧阴离子自由基接触，进而清除超氧阴离子自由基，在保证Cu/Zn‑SOD生物活性的同时，有效防止了水解酶类对Cu/Zn‑SOD的水解作用，其生物活性保存效果优于天然Cu/Zn‑SOD，且无需改变酶分子表面结构、操作简单、条件温和、可控性强。

技术领域：

本发明涉及包裹有Cu/Zn-SOD的聚电解质微囊的制作方法。

背景技术：

作为生物体内重要的自由基清除剂，在抗氧化和防止机体衰老等方面具有重要应用价值，SOD自从被发现以来便受到国内外学者的青睐，对于SOD性质的研究也越来越深入，但是有一个关键问题一直困扰着研究者们，即如何更长久保持SOD生物活性的问题已经成为了人们研究的重要课题。

另外，层层自组装技术(LBL)在制膜方面具有独特的优势，在医药学领域中，利用此技术可以制备纳米级微囊，例如通过聚电解质包埋药物，在保护药物疗效的同时，可以有效实现药物的缓释。

目前，国内外还没有关于通过制备聚电解质微囊来包裹Cu/Zn-SOD，从而保护其生物活性方面的详细报道。

发明内容：

发明目的：基于保护Cu/Zn-SOD活性的目的，利用LBL技术可以在生物大分子表面包裹聚电解质薄膜的优势，制备纳米级聚电解质微囊，包裹Cu/Zn-SOD，从而防止其被其他水解蛋白水解，进而保护其生物活性。

本发明的技术方案：发明原理如图1所示：A为碳酸钙与Cu/Zn-SOD共聚物，B为阳离子聚电解质聚烯丙基胺盐酸盐(PAH)包裹的共聚物，C为阴离子聚电解质聚苯乙烯磺酸钠(PSS)包裹的共聚物，D为PAH/PSS多层膜包裹后的共聚物，E为溶除碳酸钙模板后的包裹有Cu/Zn-SOD的聚电解质微囊。其中外层聚电解质多层膜为网状结构，不影响溶液中离子的进出膜，Cu/Zn-SOD可以与体系中超氧阴离子自由基接触，进而清除超氧阴离子自由基，发挥其抗氧化的作用。与此同时，聚电解质薄膜又能阻隔其他生物大分子进入微囊内与Cu/Zn-SOD接触，类似胰蛋白酶等水解酶类无法与Cu/Zn-SOD接触，从而防止了其对Cu/Zn-SOD的水解作用，因此该微囊的制备可以达到在不影响Cu/Zn-SOD发挥其生物活性的同时，又能对Cu/Zn-SOD起到很好的保护作用的目的。

一、一种包裹有铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)的聚电解质微囊的制备，包括碳酸钙与Cu/Zn-SOD共聚物的制作，聚阳离子电解质PAH与聚阴离子电解质PSS的交替组装，碳酸钙模板的溶除。如图1所示，经过一系列制作过程，Cu/Zn-SOD被成功包裹于聚电解质微囊内。

二、一种包裹有铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)的聚电解质微囊的制备流程：

A、Cu/Zn-SOD与碳酸钙纳米颗粒共沉淀

取一定量的CaCl₂溶液加入离心管中，然后加入等量的Cu/Zn-SOD，静置一会，再加入等量的Na₂CO₃溶液，立刻用移液枪吹打，混合均匀，12000rpm离心30s，弃上清，得沉淀即为碳酸钙纳米颗粒与Cu/Zn-SOD共聚物。

B、聚电解质包裹碳酸钙纳米颗粒与Cu/Zn-SOD共聚物