[发明专利]中药材或中药制剂中细胞保护生物活性测定的新方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药制剂的新发现的一种生物活性或者根据该活性研制的质量检测方法，确切的说，本发明涉及一种含有水蛭或地龙药材成分的中药制剂的新发现的生物活性及其测定方法，该方法可用于产品的质量控制或有效成分的确定。

背景技术

近年来，丝裂原激活蛋白激酶家族(mitogen activated protein kinases，MAPKs)在适应性细胞保护中的作用日益受到重视。MAPK酶属于酪氨酸激酶系统，是信号从细胞外转到细胞内的传递者。它可以诱导某些应激性蛋白的快速表达，如热休克蛋白、超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶、ATP敏感性钾通道、抗氧化因子等，而这些内源性效应分子表达的增加是预处理延迟保护的物质基础。

细胞外信号调节蛋白激酶(Extracellular signal-regulated kinases，ERKs)是MAPK家族的成员之一，分为ERK1(p44)和ERK2(p42)两种同工型。细胞外的不同刺激如丝裂原、生长因子、血管紧张素ò和氧化应激等均可激活ERKs。活化的ERKs主要参与细胞生长、分化和抗凋亡作用。Guyton等(Guyton KZ，Liu Y，Gorospe M，Xu Q，Holbrook NJ.Activation of mitogen-activated protein kinase by H₂0₂.Role in cell survival following oxidantinjury.J Biol Chem.1996Feb23；271(8)：4138-42.)报道，ERK可对抗氧化应激损伤，提高细胞存活率。神经递质去甲肾上腺素可通过激活ERK1/2而增强对多巴胺能神经元的保护作用(Troadec JD，Marien M，Mourlevat S，eT a1.Activation of the mitogen-activated protein kinase(ERK(1/2))signaling pathway by cyclic AMP potentiates the neuroprotective effect of the neurotransmitter noradrenaline on dopaminergic neurons.Mol Pharmacol.2002Nov；62(5)：1043-52.)。ERK的激活也能促进PC12细胞的生长(Hansen Tv，Rehfeld JF，Nielsen FC.KCl potentiates forskolin-induced PC12cell neurite outgrowth via protein kinase A and extracellular signal-regulated kinase signaling pathways.Neurosci Lett.2003Aug14；347(1)：57-61.)。越来越多的研究表明，ERK在多种预处理引起的细胞保护中起着重要的作用。也有报道指出，ERK1/2参与了药物或缺血预处理诱导的心肌延迟保护作用(Fryer RM，Hsu AK，Gross GJ.ERK and p38MAP kinase activation are components of opioid-induced delayed cardioprotection.Basic Res Cardiol.2001Apr；96(2)：136-42.)。因此，ERK的细胞保护作用是多方面的。

水蛭是一味传统的中药，始载于《神农本草经》，中医认为它具有破血、逐瘀、通经的作用。历来用于治疗症瘕、痞块、血瘀闭经、跌打损伤。现代医学发现水蛭主含蛋白质，此外含有17种氨基酸，包括人体必需的8种氨基酸，还含有Zn、Mn、Fe、Co、Cr、Se、Mo、Ni等14种元素。具有抗凝、降低血小板聚集率、降低血脂、抗炎作用等。水蛭中的水蛭素是作用最强的凝血酶特异性抑制剂，它不仅能阻止纤维蛋白原的凝固，也可阻止凝血酶催化的进一步血瘀反应，如凝血诱导的血小板反应等。由于水蛭素能有效地抑制游离的和凝血块上的凝血酶，因此可用以防止各类血栓的形成及延伸。