[发明专利]一种HPLC法检测氯卡色林盐酸盐含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用高效液相色谱法测定化学物质含量的方法，具体是一种HPLC法检测氯卡色林盐酸盐含量的方法。

背景技术

氯卡色林盐酸盐是一种新型的减肥处方药，2012年6月美国食品药品管理局(FDA)正式批准了Arena制药公司的新减肥药lorcaserin(盐酸氯卡色林)上市，成美国13年来首个减肥处方药。该药获准用于成人体质指数(BMI)≥27的肥胖或超重者，并且患者至少有一项与体重相关的疾病(如高血压、2型糖尿病或高脂血症)。其分子式为C11H14CLN·HCL，化学名为（R）-8-氯-1-甲基-2，3，4，5-四氢-1H-3-苯并氮杂卓盐酸盐。

由于本发明所涉及的氯卡色林盐酸盐是一种刚上市的新产品，其含量的检测目前没有统一的方法，由于该产品在合成的过程中，或多或少会产生中间体，降解产物及工艺杂质，因此进行含量测定时，如何选择适宜的检测方法及检测条件，使杂质与主成分有效分离，进而准确地测定出氯卡色林盐酸盐的含量，是生产企业亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的就是提供一种能快速准确地测定氯卡色林盐酸盐含量的方法。

   本发明的一种HPLC法检测氯卡色林盐酸盐含量的方法，包括以下步骤：

 a.配制混合空白溶液

分别取质量分数为0.1%的三氟乙酸水溶液及质量分数为0.1%的 三氟乙酸乙腈溶液（将三氟乙酸溶于乙腈中）按1:1体积比配制成空白溶液；

b.配制对照品溶液

称取氯卡色林盐酸盐对照品10mg于10ml容量瓶中，加入步骤a所配制的混合空白溶液溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成1mg/ml的对照品溶液；

c.配制供试品溶液

称取氯卡色林盐酸盐供试品10mg于10ml容量瓶中，加入步骤a所配制的混合空白溶液溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成1mg/ml的供试品溶液；

d.色谱条件

高效液相色谱议：安捷伦1220

色谱柱：phenomenexluna C18,250mm*4.6mm,5μm;

混合流动相：流动相A：0.1%三氟乙酸水溶液及

                  流动相B：0.1%三氟乙酸乙腈溶液

采用二元梯度洗脱，一定时间内流动相A及流动相B的比例如下表所示：

   

流速：1.0ml/min，检测波长：226nm,

进样体积：2μl，柱温35℃；

e.色谱分析

在上述色谱条件下，将空白溶液、对照样品溶液、供试品溶液分别注入色谱仪，记录色谱图；

f.根据对照品和供试品色谱图中的峰面积,通过外标法即可计算出供试品中氯卡色林盐酸盐的含量。

本发明方法通过对色谱条件的考察实验，最终确定以C18反相色谱柱，选择三氟乙酸水溶液及三氟乙酸乙腈溶液为混合流动相，采用二元梯度洗脱的方法，能有效将氯卡色林盐酸盐与其它杂质分离，分离度大于1.5，且主峰出峰时间为10min左右；本发明采用C18柱，较经济实用；选用混合流动相作为空白溶液及溶解供试品和对照品的溶剂确保了溶液系统的稳定性；选择进样体积2μl,说明本方法响应度高；选择柱温为35℃，提高了色谱峰的对称性。本发明方法通过加样回收实验，平均回收率为99.92%,检测结果的RSD为1.07%，小于2.0%，说明本方法准确度高；同时该方法氯卡色林盐酸盐的检测限为0.3μg，定量限为1.0μg，在0.1-1.0μg/ml范围内呈良好的线性关系（r²=0.9957））,精密度：RSD=0.5%，表明本方法精密度良好，可作为本行业的通用检测方法申报推广。

附图说明

图1是用本发明方法测定的混合空白溶液色谱图；

图2是用本发明方法测定的氯卡色林盐酸盐对照品溶液色谱图；

图3是用本发明方法测定氯卡色林盐酸盐供试品（20140101）的色谱图；

图4是用本发明方法测定氯卡色林盐酸盐供试品（20140102）的色谱图；

图5是用本发明方法测定氯卡色林盐酸盐供试品（20140103）的色谱图；

图中：1—杂质A色谱峰，2—供试品色谱峰，3—杂质B色谱峰。

具体实施方式

实施例1  以湖北朗昕生化药业有限公司生产的氯卡色林盐酸盐产品作为供试品，测定其中氯卡色林盐酸盐含量，具体操作步骤如下：

1.配制混合空白溶液