[发明专利]一种龙虎人丹植物药血浆中的8种不挥发性成分的含量检测方法

权利要求书

1.一种龙虎人丹植物药血浆中8种不挥发性成分含量的检测方法，该方法由以下步骤组成：

(1)哺乳类血浆样品预处理

将哺乳类给予龙虎人丹植物药后的含药血浆，加入混合标准溶液、混合内标后，加乙酸乙酯，血浆与乙酸乙酯的体积比为1∶10-15，涡旋混匀3-5分钟，16000-20000rpm高速离心，移取上清液于另一试管中，30-40℃氮气吹干，用流动相溶液复溶，涡旋混匀3-5分钟，16000-20000rpm离心10-20分钟；

按进样量为1-20μL对Thermo Scientific Hypersil GOLD C18分析柱进样，控制柱温为20℃-40℃，接着用由A相和B相组成的流动相以0.2-1.5mL/min的速度按照表1的程序进行梯度洗脱，同时利用高效液相色谱-三重四级杆质谱联用技术检测洗脱液，获得供试品药物及对照品药物的离子色谱图；

表1

(2)所得SMR色谱图对应特征峰分别为儿茶素、表儿茶素、甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、胡椒碱、甘草次酸、以及内标卡马西平、香豆素-3-羧酸，前8种待测成分分别按照回归方程(一)-(八)的标准曲线计算含量：(一)y＝0.0081x-0.0141，(二)y＝0.0086x-0.0187，(三)y＝0.0800x-0.0111，(四)y＝0.1511x-0.0132，(五)y＝0.2829x+0.0038，(六)y＝0.5408x+0.0030，)(七)y＝0.4570x+0.0047，(八)y＝0.0057x+0.0019；

上述步骤中，

所述流动相A相为0.01-0.02％的乙酸水溶液；所述乙酸水溶液中含有0.1-0.3mM乙酸铵水溶液；B相为乙腈；

实验中质谱条件为：TSQ Quantum Ultra三重四极杆质谱仪，电喷雾离子源(HESI-II)，正离子模式，喷雾电压分别为3000v，雾化温度为300℃，鞘气为40psi，辅助气为10psi，离子传输毛细管温度为300℃；负离子模式，喷雾电压分别为-2500v，雾化温度为300℃，鞘气为40psi，辅助气为10psi，离子传输毛细管温度为300℃。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于用如表2所示程序代替表1进行梯度洗脱

表2

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于用如表3所示程序代替表1进行梯度洗脱

表3

4.根据权利要求1～3之一所述的检测方法，其特征在于所述梯度洗脱过程中的柱温为40℃。

5.根据权利要求1～3之一所述的检测方法，其特征所述哺乳类血浆样品的预处理过程中的氮气温度为35℃。

6.根据权利要求1～3之一所述的检测方法，其特征所述哺乳类血浆样品的预处理过程中的离心条件18000rpm。

7.根据权利要求1～3之一所述的检测方法，其特征所述哺乳类血浆样品的预处理过程中的离心条件15分钟。

8.根据权利要求1～3之一所述的检测方法，其特征所述梯度洗脱过程中A相为0.01％的乙酸水溶液；所述乙酸水溶液中含有0.2mM乙酸铵。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于使用乙酸丁酯代替哺乳类血浆样品预处理过程中所使用的乙酸乙酯溶剂。

10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于使用异丙醇代替哺乳类血浆样品预处理过程中所使用的乙酸乙酯溶剂。

11.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于使用氯仿代替哺乳类血浆样品预处理过程中所使用的乙酸乙酯溶剂。

12.根据权利要求1～3之一所述的检测方法，其特征所述哺乳类血浆样品的流动相溶剂为30％的乙腈。

13.根据权利要求1～3之一所述的检测方法，其特征所述哺乳类血浆样品的流动相乙腈溶剂浓度为20-40％。