[发明专利]一种茅苍术组培快繁的方法

权利要求书

1.一种茅苍术组培快繁的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

（1）茅苍术种子处理与消毒灭菌：选取茅苍术种子，清洗后进行消毒灭菌处理；

（2）建立无菌培养体系: 将消毒灭菌后种子接入发芽培养基，在设定的培养条件下，10~14天发芽，约一个月后，长成幼苗；

（3）愈伤组织诱导: 将步骤（2）培养的无菌幼苗去除根系，剪去叶片，保留嫩茎，基部向下接入愈伤组织诱导与分化培养基，在设定的培养条件下，培养10~14天后，嫩茎基部膨大逐渐形成绿色到褐色愈伤组织；

（4）愈伤组织分化成苗：在步骤（3）的基础上继续培养， 20~28天后愈伤组织上分化出丛生芽， 45~50天后丛生芽陆续形成丛生苗；

（5）无菌苗增殖培养：将步骤（4）中的丛生苗从愈伤组织基座上分株，剪去叶片，保留嫩茎，接入增殖培养基，在设定的培养条件下， 5~9天后开始出芽， 18~24天后形成丛苗；

（6）无菌苗生根培养：取步骤（5）中高5cm以上、性状稳定的单株健壮幼苗，接种至生根培养基，在设定的培养条件下， 21~28天后完成生根；

（7）炼苗移栽：挑选步骤（6）中叶片数多于8片、不定根数多于12，苗高超过6cm的壮苗，先将组培瓶移至常温15℃下锻炼一周，移栽前两天开瓶盖，并浇水保持叶片不萎缩，移栽时将苗去除培养基并洗净后定植于穴盘，经灭菌处理后，将穴盘置于温室，相对湿度保持80%以上， 14~21天苗长出新叶，即可认为成活。

2.根据权利要求1所述的一种茅苍术组培快繁的方法，其特征在于，所述设定的培养条件为光照强度:2000~2500lx；光照时间：12~15h/d；培养温度：22±2℃；培养地点无菌培养室。

3.根据权利要求1所述的一种茅苍术组培快繁的方法，其特征在于，所述步骤（1）中消毒灭菌处理方法为；将清洗后的种子加入清水浸泡0.5~1h，浸泡结束后，用流动水反复冲洗，再用蒸馏水冲洗两次，然后用体积百分比为70%乙醇溶液浸泡约20~30s，再用质量百分比为0.1%氯化汞溶液浸泡15min~18min，最后用无菌水冲洗至少3遍，在无菌滤纸上吸干水分备用。

4.根据权利要求1所述的一种茅苍术组培快繁的方法，其特征在于，所述步骤（2）中发芽培养基为MS+质量百分比为3%的蔗糖+质量百分比为0.75%琼脂，所述培养基PH为5.8~6.2。

5.根据权利要求1所述的一种茅苍术组培快繁的方法，其特征在于，所述步骤（3）中愈伤组织诱导与分化培养基为MS+0.5~1.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤+0.05~0.15mg/L的萘乙酸+质量百分比为3%的蔗糖+质量百分比为0.75%琼脂，所述培养基PH为5.8~6.2。

6.根据权利要求1所述的一种茅苍术组培快繁的方法，其特征在于，所述步骤（5）中增殖培养基为MS+0.5~1.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤+0.1~0.3mg/L 的萘乙酸+质量百分比为3%的蔗糖+质量百分比为0.75%琼脂，所述培养基PH为5.8~6.2。

7.根据权利要求1所述的一种茅苍术组培快繁的方法，其特征在于，所述步骤（6）中生根培养基为1/2MS+0.1~0.2 mg/L 的萘乙酸+ 0.5%~0.8%的活性炭+3%的蔗糖+0.75%琼脂，所述培养基PH为5.8~6.2，以上百分数均为质量百分数。

8.根据权利要求1所述的一种茅苍术组培快繁的方法，其特征在于，所述步骤（7）中在穴盘中装有移栽基质，移栽基质包括如下重量比的组分，泥炭土：蛭石：普通黄土=1~2：1~2：1~2。

9.根据权利要求1所述的一种茅苍术组培快繁的方法，其特征在于，所述步骤（7）中移栽后每隔7天喷施一次多菌灵粉剂杀菌，喷施量以苗叶片湿润为宜，待苗长出新叶即可停止喷施。