[发明专利]一种优化的电穿孔技术转染悬浮细胞的方法在审
| 申请号： | 201410166759.7 | 申请日： | 2014-04-24 |
| 公开（公告）号： | CN103981218A | 公开（公告）日： | 2014-08-13 |
| 发明（设计）人： | 侯雯婷;蒋卫;李慧;张超;李刚 | 申请（专利权）人： | 北京大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100191*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 优化 穿孔 技术 转染 悬浮 细胞 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种转染悬浮细胞的方法，其特征在于以预热的含10％血清的RPMI-1640细胞培养基为电穿孔缓冲液，混合细胞与外源DNA混合，然后用电转化系统进行电转染，将外源DNA导入细胞内。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的电转染缓冲液不含抗生素。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的预热环境为37℃恒温细胞培养箱。
4.一种转染人CEM×174细胞系的方法，CEM×174细胞系为人T、B淋巴母细胞杂交系，其特征在于，以预热的含10％血清的RPMI-1640细胞培养基为电穿孔缓冲液，将细胞与外源DNA混合，然后用电转化系统进行电转染，将外源DNA导入细胞内，预热温度为37℃，所述细胞培养基不含抗生素。
5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于电转体系中细胞浓度是5×106～1×107个细胞/ml。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于电转染条件为，在4mm电极杯中以210mV脉冲电击一次，持续时间30ms。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于转染过程中，细胞浓度∶质粒线性长度∶质粒重量比为106∶1kb∶1μg。
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