[发明专利]RUNX1基因断裂及拷贝数增加检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种RUNX1基因断裂及拷贝数增加检测试剂盒，其特征在于：由下列成分组成：试剂I、纯化试剂Ⅱ、沉淀试剂Ⅲ、杂交缓冲试剂Ⅳ，试剂盒中各试剂用量见表1，所列试剂的量为10个探针用量：

表1

其中：试剂Ⅰ的组分及各成分浓度、用量见表2，

表2

试剂Ⅱ的组分及各成分浓度、用量见表3，

表3

试剂Ⅲ的组分及各成分浓度、用量见表4， 

表4

试剂Ⅳ的组分及各成分浓度、用量见表5，

表5

。

2.根据权利要求1所述的一种RUNX1基因断裂及拷贝数增加检测试剂盒，其特征在于：制备方法包括以下步骤：（1）从人类BAC克隆库中挑选RP11-177L11、RP11-77I17作为探针序列，RP11-177L11包括了人类RUNX1基因的5’端第一外显子及上游区序列，全长162kb；RP11-77I17包括了人类RUNX1基因的3’端第八外显子和下游的CLIC6基因序列，全长160kb；

（2）采用缺口平移法标记RP11-77I17为红色，标记RP11-177L11为绿色，标记探针所用具体组分以及各组分浓度、用量见表6；

表6

（3）用试剂Ⅱ将标记的探针序列纯化：按试剂Ⅱ的比例加入标记红色和绿色的探针序列各200μl及试剂Ⅱ的组成成分，混匀，-80℃静置1小时或-20℃静置过夜,然后4℃、12000rpm/min离心30min，弃上清；加入预冷的70%乙醇200μl，4℃，12000rpm/min离心10min，弃上清，45℃干燥，加入100μl去离子水，棕色管中保存；

（4）用试剂Ⅲ将纯化的探针序列沉淀，进一步纯化：取试剂Ⅱ纯化了的红色、绿色的探针各10μl，分别加入试剂Ⅲ中各组分的1/10，-80℃沉淀1h以上或过夜；取出沉淀的探针，4℃、12000rpm/min离心30min，弃上清，加入预冷的70%乙醇300μl，然后4℃、12000rpm/min离心15min，弃上清，45℃干燥5min，沉淀为半透明即可；

（5）使用前用试剂Ⅳ溶解探针：FISH操作前，将干燥的沉淀探针按照试剂Ⅳ的比例加入杂交缓冲液，一个探针用1/10的试剂Ⅳ溶解，振荡溶解，离心数秒混匀，沉淀完全溶解后备用。