[发明专利]分化无核细胞及其制备方法

说明书

本申请是申请日为2009年7月21日、申请号为200980126312.4、发明名称为“分化无核细胞及其制备方法”的发明专利申请的分案申请。

相关申请案交叉参考

本申请案主张2008年7月21日申请的标题为分化细胞及其制备方法(Differentiated Cells and Processes for Preparing the Same)的美国临时申请案第6I/082,410号的优先权，其全部内容以引用方式并入本文中。

技术领域

本申请涉及分化无核细胞及其制备方法。

背景技术

无核细胞包括(但不限于)红细胞及凝血细胞。红细胞及凝血细胞来源于造血干细胞分化。

发明内容

在某些实施例中，本发明揭示制备多种无核细胞的方法，其包含：在至少一种引导朝向无核细胞分化的细胞因子存在下培养条件永生化干细胞；其中通过以下来产生所述条件永生化干细胞：(a)使用第一载体转染多种干细胞，所述第一载体包含编码MYC分子的核酸序列；(b)使用第二逆转录病毒载体转染所述干细胞，所述第二载体包含编码Bcl-2、Bcl-X或其组合的核酸序列；及(c)将所述干细胞与IL-3、IL-6、干细胞因子、血小板生成素、Flt3配体或其组合一起培养；且其中在分化之前已抑制所述Myc分子的活性。在一些实施例中，引导朝向无核细胞分化的细胞因子是IL-3、EPO或其组合。在一些实施例中，MYC分子是c-Myc、1-Myc、n-Myc、s-Myc或其组合。在一些实施例中，第一载体进一步包含人类雌激素受体的激素结合结构域。在一些实施例中，所述方法进一步包含诱导Myc分子移位至细胞核。在一些实施例中，所述方法进一步包含使所述多种干细胞与雌二醇(E2)、4-羟基他莫昔芬(4-OHT)或二者接触。在一些实施例中，第一载体、第二载体、或第一载体与第二载体二者是鼠科动物干细胞病毒(MSCV)或其衍生物。在一些实施例中，第一载体、第二载体、或第一载体与第二载体二者是MSCV-(IRES)-GFP或其衍生物。在一些实施例中，第一载体、第二载体、或第一载体与第二载体二者是MSCV-(IRES)-GFP，且进一步包含土拨鼠乙型肝炎病毒RNA调控元件(WRE)。

在某些实施例中，本发明揭示产生多种无核细胞的方法，其包含：在至少一种引导朝向无核细胞分化的细胞因子存在下培养条件永生化干细胞；其中通过以下来产生所述条件永生化干细胞：(a)使多种干细胞与外源合成的第一肽接触，所述第一肽包含移位至细胞核的MYC分子；(b)使所述干细胞与外源合成的第二肽接触，所述第二肽包含Bcl-2、BCL-X或其组合；及(c)将所述干细胞与IL-3、IL-6、干细胞因子、血小板生成素、Flt3配体或其组合一起培养；且其中在分化之前使所述第一肽与所述条件永生化干细胞不接触。在一些实施例中，第一肽进一步包含人类雌激素受体的激素结合结构域。在一些实施例中，第一肽、第二肽、或第一肽与第二肽二者包含转运蛋白序列。在一些实施例中，第一蛋白质、第二蛋白质、或第一蛋白质与第二蛋白质二者包含TAT序列。在一些实施例中，所述方法进一步包含使所述多种干细胞与雌二醇(E2)、4-羟基他莫昔芬(4-OHT)或二者接触。